【摘 要】
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本研究在大肠杆菌中表达了GST-SaPIN2b融合蛋白,尝试得到具有生物学活性的蛋白质,并使用表达的融合蛋白制备SaPIN2b抗体。融合蛋白在大肠杆菌中大部分以包涵体的形式大量表
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本研究在大肠杆菌中表达了GST-SaPIN2b融合蛋白,尝试得到具有生物学活性的蛋白质,并使用表达的融合蛋白制备SaPIN2b抗体。融合蛋白在大肠杆菌中大部分以包涵体的形式大量表达,以融合蛋白作为抗原通过免疫兔子得到了抗体,经过鉴定,抗体的专一性和效价都比较高。
本研究将SaPIN2a和SaPIN2b两种cDNA分别在转基因烟草中过量表达,得到转基因烟草。通过分子杂交和酶学分析发现,异源表达的SaPIN2a和SaPIN2b蛋白仍具有抑制剂活性。转基因烟草的总蛋白粗提液比野生烟草总蛋白粗提液具有针对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶强得多的抑制活性,这表明这两种蛋白都具有针对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制能力。本研究还用SaPIN2a和SaPIN2b转基因烟草喂养斜纹夜蛾(Spodopteralitura),初步评估了这两种基因的抗虫能力。
本研究还构建了SaPIN2b的RNA干涉载体,转化龙葵,使转基因龙葵中的SaPIN2b基因表达沉默,用以研究SaPIN2b的生理功能。本研究曾尝试在龙葵中过量表达SaPIN2b基因,但是没有成功。通过比较过量表达SaPIN2a和SaPIN2b的转基因烟草种子的萌发情况,提示SaPIN2b蛋白可能具有某些重要的生理功能。
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