芘基荧光探针在血清白蛋白/肝素检测中的应用

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蛋白质和多糖是机体组成及生物功能的主要承担者。血清白蛋白(HSA)是血浆中含量最丰富的蛋白质,在运输药物和保持血液渗透压等方面起着关键作用。HSA的浓度水平与机体健康情况密切相关,如血液和尿液中HSA的含量是心血管和肾脏疾病的重要参考指标和临床前诊断的重要参数。肝素(Hep)是体内电荷密度最高的黏多糖,在血液抗凝过程中发挥重要作用,是临床上预防手术过程凝血和治疗血栓性疾病应用最广泛的药物。然而,Hep用药过量将引起出血、血小板减少症、高钾血症等副作用。因此,发展HSA和Hep的高效便捷的定量分析或检测方法对相关疾病的预防和早期诊断具有重要意义。荧光探针技术以荧光染料作为指示剂,基于荧光信号(强度、波长、寿命等)与目标物浓度间的定量关系,在激发光的照射下通过测定荧光信号的变化实现目标物的定性和定量分析。相比色谱、质谱、核磁等方法,基于分子探针的荧光分析法具有操作简单、灵敏度高、响应快速、成本低廉、适用于现场检测等优点,在卫生检验、生物医学等领域展现出巨大应用潜力。针对HSA的定量分析,以芘-氰基苯共轭骨架为发光单元,设计并合成了一种带有负电荷的新型荧光探针PYPOS,考查了其光物理学性质及其对常见蛋白质(如血清白蛋白、胰岛素、酯酶、胰蛋白酶、溶菌酶等)的荧光响应性,探究了PYPOS与蛋白质的结合机制,应用于尿液样品中HSA的快速定量分析。PYPOS具有典型的聚集诱导发光(AIE)性质,在水溶液中荧光微弱;遇到蛋白质分子后,能够通过氢键、疏水等作用力被吸附并固定到蛋白质空腔中,荧光显著增强。PYPOS的荧光光谱对蛋白质分子表现出广谱、高灵敏、快速、稳定的荧光响应性,并且不受离子、多糖、维生素及氨基酸的干扰。PYPOS能够应用于尿液样本中HSA的精准定量,线性范围为0.28-100μg/ml,检测限为0.28μg/ml。还可以应用于临床尿蛋白的分级和裸眼鉴别,从而为蛋白尿的快速检测和肾病患者的居家监测提供了便捷有效的工具。针对Hep的检测,以芘和吡啶为基本构成单元,设计合成了一种带有两个正电荷的新型荧光探针PYPN,考查其光物理学性质及其对Hep的分析性能,建立了血清中肝素的荧光分析方法。PYPN在Hep检测中具有以下特点:荧光发射在500-700 nm,能够有效降低血清基质背景荧光的干扰;响应时间在30秒内,适用于现场快速检测;颜色和荧光变化明显,适用于裸眼检测;选择性好,受离子、硫醇、白蛋白、ATP和其它糖胺聚糖的干扰小。PYPN能够应用于人、兔和牛等动物血清中肝素的精准定量,检测限为0.74-0.82μg/ml。
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