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大蒜属于百合科(Lilicacene)葱属植物(Alliums)。自然情况下大蒜为多种病毒复合侵染,主要包括马铃薯Y病毒属病毒,麝香石竹潜隐病毒属病毒和青葱X病毒属病毒。大蒜X病毒(Garlic virus X,GarVX)是导致大蒜病毒病害的重要病原之一,隶属葱X病毒属(Allexivirus)。Gar VX是单链正义RNA病毒,由8106个核苷酸组成,除去3’末端poly(A)结构外,具有六个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),其中ORF6编码的15kDa(p15)蛋白推测为一个半胱氨酸富集蛋白(cysteine-rich proteins,CRPs)。据报道称,植物病毒编码的CRPs蛋白多为病毒致病的决定因子,同时许多病毒的CRPs具有沉默抑制作用,但p15具体功能未知。本研究中,我们以GarVX ORF6编码的p15蛋白为研究对象。构建p15蛋白的绿色荧光表达载体,通过共聚焦显微镜观察显示p15蛋白定位在细胞外周、细胞核和核仁中。马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)介导p15蛋白过量表达(PVX-p15)与PVX-GFP对比能引起本氏烟矮化,叶片畸形并导致PVX的积聚增加,表明p15为PVX-p15的病毒致病因子。此外,使用农杆菌浸润16c烟草表达和芜菁皱纹病毒(TCV)运动互补测定,证明p15具有弱RNA沉默抑制活性。核定位信号(Nuclear localization sequence,NLS)缺失突变体(p15m)不在细胞核内的积累,其PVX-p15m的致病能力减弱,但是沉默抑制作用没有消失。综上所述,本实验对GarVX p15的功能进行了初步验证,明确了P15能定位到细胞核和核仁中,PVX过量表达p15实验表明p15为PVX-p15的病毒致病因子,同时p15具有沉默抑制子功能,且其核定位突变体与p15的致病性有关,但不影响其抑制子功能。对GarVX p15的功能研究有助于了解该属病毒的致病机制。