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目的：分析DNMT3B表达抑制后肿瘤相关基因的表达情况及其启动子区甲基化状态,探讨DNMT3B调控肿瘤相关基因表达的可能机制。
方法：应用实时荧光定量RT-PCR(Real-Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)方法分析肝癌细胞系SMMC-7721中DNMT3B表达抑制所诱导的发育和肿瘤发生相关的基因MTSS1、AREG、FADS1和NOTCH1的表达,并以MSP(Methylated Specific PCR,MSP)和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite Sequencing)的方法检测上述肿瘤相关基因启动子区CpG岛的甲基化状态。以组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理SMMC-7721细胞系,检测组蛋白乙酰化作用是否可能参与上述肿瘤相关基因的表达调控。
结果：在肝癌细胞系SMMC-7721中,由RNA干扰所致的DNMT3B表达抑制诱导了5端含CpG岛的肿瘤相关基因MTSS1、AREG、FADS1、NOTCH1的表达；对其启动子区CpG岛的甲基化状态进行检测,发现其甲基化状态没有发生明显的改变；进一步评价DNMT3B抑制前后MTSS1启动子区69个CpG位点甲基化比率,发现DNMT3B表达抑制细胞系SMMC-7721-pMT3B中MTSS1启动子区CpG位点甲基化比率为36.09％,SMMC-7721-sMT3B细胞系MTSS1启动子区CpG位点甲基化比率为36.38％,二者无显著性差异(P>0.05)。以TSA处理SMMC-7721细胞系后,发现FADS1、AREG、NOTCH1呈现出不同程度的表达上调,尤其是AREG在TSA处理后的SMMC-7721细胞系中呈明显的表达上调。TSA处理SMMC-7721细胞系发现,MTSS1出现了一定程度的表达下调。进一步分析TSA处理是否影响了DNMTs的表达,发现TSA处理24h即可见DNMT3B的表达水平显著升高(P<0.05),而DNMT1和DNMT3A则无此倾向。此外MTSS1表达的高低与DNMT3B的表达水平呈负相关,即DNMT3B表达低时,MTSS1表达高；反之,亦然。
结论：通过以上实验及结果,本研究得到以下结论：
1.DNMT3B表达抑制诱导了肿瘤相关基因的表达。
2.SMMC-7721中,MTSS1表达的高低与DNMT3B的表达水平有关。
3.DNMT3B表达抑制诱导肿瘤相关基因的表达,但并没有明显地改变其启动子区甲基化状态；DNMT3B可能通过不依赖于其甲基催化功能的方式调控肿瘤相关基因的表达。
4.TSA处理影响了部分DNMT3B调控的肿瘤相关基因的表达。