TNF-α对间充质干细胞来源的囊泡microRNA差异性表达分析

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目的:探讨肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor Alpha,TNF-α)对间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)及其培养上清液囊泡(Exosomes)的microRNAs(miRNA)差异性表达的影响,对其靶基因与对应信号通路进行关联分析。方法:用TNF-α(20ng/ml)刺激MSCs,称为细胞TNF-α组(TC组),另一组为细胞对照组(NCC组);48h后收集两组细胞及上清液;上清液使用ExoQuick-TC试剂获得Exosomes,分别称为囊泡TNF-α组(TE组)及囊泡对照组(NCE组);分别提取细胞及囊泡RNA,对获得的miRNA进行高通量测序(high-through put sequence),并行差异性表达分析。最后利用GO Ontology和KEGG Pathway对差异性表达miRNA的靶基因与所对应的信号通路进行关联分析。结果:与NCC组比较发现,TC组差异性表达miRNA有280个,上调表达的只有miR-146a-5p,在279个下调miRNA中最具有显著差异表达的是miR-150-5p。与NCE组对比发现,TE组差异性表达miRNA有180个,其中mi R-146a-5p和miR-203b-5p分别是176个上调表达和4个下调表达最具显著性的。生物学分析发现IRAK1是miR-146-5p调控TOLL样受体炎症代谢信号通路的重要靶基因。结论:TNF-α刺激后,MSCs及培养基上清液囊泡的miRNA表达与正常对照组对比有显著差异性,其中miR-146a-5p在各对比组都是上调的;mi R-146a-5p的靶基因IRAK1在TLR通路中扮演重要的角色,为后续炎症反应研究提供新的理论方向。
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