RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞miRNA表达谱的影响

来源 :南华大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:cyanh77
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目的:建立稳定高表达RASSF1A人胃癌SGC-7901细胞株;探讨RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞miRNA表达谱的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3.1-RASSF1A质粒和空载体pcDNA3.1质粒分别导入SGC-7901细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,RT-PCR、Western blotting检测RASSF1A基因表达;采用丹麦Exiqon公司miRNA芯片分析高表达RASSF1A基因的pcDNA3.1-RASSF1A-SGC-7901细胞株与空质粒对照组pcDNA3.1-SGC-7901细胞株之间的miRNA差异表达情况,采用GenePix pro V6.0和Axon GenePix4000B分析有统计学意义的差异表达位点,挑选差异表达的miRNA中的三个miRNA(miR-181a、miR-181b、miR-711)并进行miRNA qRT-PCR分析,进一步验证miRNA芯片结果。结果:通过脂质体转染技术成功建立稳定高表达RASSF1A基因人胃癌SGC-7901细胞株;运用miRNA芯片筛选转染RASSF1A基因前后人胃癌SGC-7901细胞,筛选出14条差异表达的miRNA,其中上调的7条,分别为:miRPlus-E1153、 miRPlus-E1225、miRPlus-E1133、 miR-377、miRPlus-E1077、miR-711、miR-1207-3p;下调的7条,分别为:miR-330-5p、miR-181a、 miR-181b、 miR-483-5p、 miRPlus-F1086、 miR-132、miRPlus-E1026;经miRNA qRT-PCR验证miR-181a、miR-181b、miR-711的表达与miRNA芯片结果一致。结论:1.高表达RASSF1A抑癌基因能导致SGC-7901细胞microRNA表达谱发生改变;2.miR-181a、miR-181b、miR-711的表达异常可能与胃癌的发生有关。
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