单宁酸鞣制对牛心包材料的改性研究

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园艺产品功能成分除了具有营养保健功能外,还在医疗产业上具有重要的应用价值。人工心脏瓣膜主要包括生物瓣膜和机械瓣膜,生物瓣膜是通过化学处理异源心包组织获得的,其血液动力学性能良好,血栓形成率低,但机械性能差,容易发生钙化(钙磷酸盐沉积),不利于长期使用。目前,通过戊二醛和其他交联剂处理,生物假体瓣膜的耐久性和防钙化性能都得到了很大改善。然而,戊二醛交联后的心包具有一定的细胞毒性,容易发生钙化衰败,因此长期使用效果不够理想。本实验在戊二醛交联的基础上,探索用园艺产品富含的天然生物交联剂单宁酸(TN)对牛心包进行了改性。以期得到具有良好细胞相容性和耐久性的异质生物瓣膜,延长瓣膜的使用寿命。主要研究结果如下:(1)制定了取膜规范化流程,热缺血时间控制在2h内,防止组织在离体后进一步代谢破坏组织结构,实现有效去除心包表面脂肪组织且不破坏心包纤维层组织结构,并进行抑菌处理,保持心包材料的最佳性能。(2)为了降低异种组织的免疫原性,用核酸酶去污剂法对新鲜牛心包进行脱细胞处理。通过对外观、HE染色、DAPI染色、力学性能、SEM电镜和TEM电镜观察脱细胞效果,发现经脱细胞处理后,细胞结构减少,力学性能增强,暴露出纤维结构,力学性能脱细胞组(CE)组较未脱细胞组(UCE)组得到提高。(3)用戊二醛(GA)固定脱细胞后的心包,之后用单宁酸(TN)进行改性。因为单宁酸具有涩性,它可以与心包中的胶原蛋白结合并凝结蛋白质。通过对外观、HE染色、力学性能、SEM电镜和TEM电镜观察并与戊二醛组进行比较,TN处理后韧性增加,力学性能提高,经SEM,TEM电镜观察看出TN处理后胶原纤维排列致密、规则且方向一致优于其他组。(4)将各组牛心包试片植入SD大鼠背部皮下包埋30d、90d,用SD大鼠皮下置入动物模型模拟患者置入后的钙化程度。取出后可以看到各组心包试片完整,无明显破损情况,对各组心包试片进行体外细胞毒性检测,通过病理切片染色方法如Von kossa银染、HE染色和PSR染色等观察试片包埋后的钙化状况。结果表明TN处理后细胞毒性较高且钙化情况较严重,细胞毒性为2级,表明TN处理后材料细胞相容性变差,且出现了易钙化现象,这可能与胶原蛋白纤维束的大量暴露有关系。
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