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研究背景:心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)是危害人类健康的首要疾病,已经上升到疾病死亡原因的榜首。其中,动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是导致CVD的一个主要原因。研究表明S-腺苷高同型半胱氨酸(SAH)是诊断心血管疾病的风险指标,血浆中SAH水平升高与心血管的高发病率显著相关。SAH是由S-腺苷蛋氨酸(SAM)转移甲基后的代谢产物。SAM作为甲基供体,由蛋氨酸在蛋氨酸转移酶的作用下转化而来,特别在DNA的甲基化过程中发挥重要作用。但是,SAM在动脉粥样硬化发生发展中的作用尚未可知。目的:探讨S-腺苷蛋氨酸对apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。方法:将40只雌雄比1:1的载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠随机分配到A、B、C、D四组中。给予高脂饮食,能够同等获得食物和水,此外B组(15mg/kg)、C组(30mg/kg)、D组(90mg/kg)每天灌胃给予S-腺苷蛋氨酸,对照组A组给予等量生理盐水,共8周。采用油红O对心脏主动脉瓣的冰冻切片进行染色,观察主动脉的动脉粥样硬化程度;使用TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测动脉粥样斑块的细胞凋亡情况;采用免疫荧光法进行SAMTOR和mTOR的蛋白定量。结果:(1)经过8周给药,40只小鼠心脏主动脉瓣油红O染色结果显示apoE基因敲除小鼠均出现不同程度的动脉粥样硬化。随着S-腺苷蛋氨酸(SAM)给药剂量的增加,动脉粥样硬化的严重程度逐渐降低。数据显示A、B、C、D组动脉粥样硬化的斑块面积为62,190±43,827μm~2、39,957±15,321μm~2、38,019±19,258μm~2、70,329±50,2568μm~2。对数据进行单向方差分析(One-Way ANOVA)结果显示C组(30mg/kg)相较于对照组,动脉粥样硬化的面积显著降低(p<0.05),之后随着SAM给药剂量的增加,动脉粥样硬化的程度有所增加。斑块面积变化随SAM浓度的增加呈现U型趋势。(2)TUNEL试剂盒检测细胞凋亡结果显示A、B、C、D组的光密度值分别为4.02±1.46、2.52±1.15、1.81±1.01、9.89±1.28。对数据进行非参数Mann-Whitney U检验结果显示C组动脉粥样硬化斑块的光密度明显低于其他组,因此C组的细胞凋亡最少。光密度的变化呈现U型趋势,这与动脉粥样硬化油红O染色结果一致。(3)免疫荧光实验结果显示,SAMTOR和mTOR蛋白在不同程度的动脉粥样硬化斑块中表达水平不同,用Image Pro Plus对免疫荧光结果进行光密度分析发现,在一定浓度范围内,增加SAM的给药浓度,减轻动脉粥样硬化的严重程度,SAMTOR的蛋白表达量逐渐升高,mTOR的蛋白表达量逐渐降低。当浓度超过一定范围,再次增加给药浓度,动脉粥样硬化的严重程度增加,SAMTOR的蛋白表达量降低,mTOR的蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:动脉粥样硬化斑块的面积越大,细胞凋亡的数量就越多。S-腺苷蛋氨酸能够抑制apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的发展程度,其抑制作用呈U型趋势。在一定浓度范围内(30mg/kg),增加给药浓度能够降低动脉粥样硬化的严重程度,超过一定浓度范围,又可以增加动脉粥样硬化的严重程度。SAMTOR和mTOR的蛋白表达水平与动脉粥样硬化的发生发展相关。