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自本世纪五十年代以来,随着全球人口老龄化趋势的日益突出,老年学和老年医学的发展逐渐得到人们的重视,有关衰老的研究正在成为热门研究课题。为了研究衰老的机制,防治老年性疾病,开发抗衰老药物,我们进行了以下几方面的研究: 衰老过程中一氧化氮等信号传导因子的改变 1.建立了测定NO及NOS活性的HPLC法。 HPLC法测定NO的回归方程: C(umol·L-1,umol·mg-1)=196.9A-3.224(r=0.9982)。 HPLC法测定NOS活性的回归方程: C(Arg)=1.9715(hArg/hNleu)+0.078278(r=0.9993)。 HPLC法测定了大鼠大脑皮层细胞NO含量及NOS活性。 青年鼠脑皮层NO(亚硝酸盐)含量为1.5439±0.1489umol·L-1。老年鼠脑皮层(亚硝酸盐)含量为2.6112±0.1001umol·L-1,与青年鼠相比增加非常显著(P<0.01)。可以看出,随着年龄的增大,大鼠脑皮层NO(亚硝酸盐)含量有增加趋势实验表明,老年鼠(30月龄)脑皮层NO含量明显高于青年鼠(5月龄)(P<0.01)。青年鼠脑皮层NOS活性为234.38±16.24fmol·mg-1·min-1。老年鼠脑皮层NOS活性为398.22±21.62fmol·mg-1·min-1,比青年鼠明显增高(P<0.01)。 Fura-2检测突触体内游离钙浓度,青年鼠(5月龄)皮层突触体内游离钙浓度为372.99±19.20nM。老年鼠(30月龄)皮层突触体内游离钙浓度为485.26±28.48nM,比青年鼠(P<0.01)显著增高。 原位杂交法检测青年鼠、老年鼠脑组织中cNOS,bcl-2 mRNA的转录水平,结果发现,青年鼠脑组织中海马处有bcl-2的基因表达,而老年鼠脑组织中几乎没有bcl-2基因表达。青年鼠脑组织中cNOS很少表达,老年鼠脑组织中cNOS基因表达比青年鼠多。 末端转移酶标记法检测衰老大鼠脑神经细胞中的凋亡,结果发现:青年大鼠的脑切片未见阳性棕色颗粒,衰老大鼠的脑切片有少量散在的阳性棕色颗粒,说明衰老大鼠开始产生细胞凋亡。