快速冷冻与慢速冷冻对复合组织血管内皮生物活性的影响

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目的因复合组织的冷冻存在快速冷冻方法与慢速冷冻方法的争议,所以本实验从这两种冷冻方法对复合组织的血管内皮细胞的影响方面,找到使血管在深低温的冷冻中损伤较小的方法,从而提高断肢(指)冷冻保存后再植手术的成功率。为临床的断肢(指)等复合组织的保存及修复寻找理论基础。方法将35只新西兰大白兔随机分为对照组、快速冷冻12H、快速冷冻3d、快速冷冻7d、慢速冷冻12H、慢速冷冻3d、慢速冷冻7d组,每组5只。①对照组将截断的大白兔10只后肢直接用10%的福尔马林容易固定;快速冷冻12小时、3天、7天组大白兔取后肢每组各10只后肢,直接放入液氮中实行快速冷冻;慢速冷冻组的12小时、3天、7天组大白兔取后肢每组各10只后肢经慢速冷冻后再投入到液氮中,依次保存12小时、3天、7天。所有冷冻组均经37℃水浴快速复温。所有快速复温后的新西兰大白兔后肢均经10%的福尔马林溶液固定。取后肢膝关节至距截肢断端约1cm长度的股动脉血管行HE染色行光镜及免疫组化检查各组血管内皮的病理变化。②对照组大白兔10只前肢取腋动脉约1cm行生物测氧仪测定耗氧量;将快速冷冻及慢速冷冻各组大白兔前肢(每组各10只)经同后肢同样冷冻处理后行37℃快速水浴复温,取大白兔10只前肢取腋动脉约1cm行生物测氧仪测定各实验组耗氧量。结果①镜观察对照组内皮细胞较少脱落,各组血管内皮细胞均有不同程度的脱落损伤,经统计分析,实验各组均与对照组存在显著性差异(P<0.05);但是实验组各组间没有显著性差异(P>0.05);②随着投入液氮后的冷冻时间的增长,不会加重对血管损伤;③免疫组化检测中,两种冷冻方法血管内皮中均可见血管生长因子呈斑片状的弱表达,与快速冷冻组相比,慢速冷冻组血管活性因子的表达更接近对照组,慢速冷冻组明显高于快速冷冻组(P<0.05)。④耗氧量的测量结果示:保存12h、3d的慢速冷冻与快速冷冻之间的耗氧量有显著差异(P<0.05)。但是慢速冷冻12h、3d组间无差异(P>0.05);快速冷冻12h组、3d组之间也没有差异(P>0.05)。结论1.复合组织经冷冻及复温后血管内皮不同程度损伤;2.与快速冷冻方法相比,慢速冷冻法对复合组织中的血管内皮细胞影响更少,能更好的保存复合组织中的血管活性。3.随着投入液氮后的冷冻时间的增长,两种冷冻方法均不会加重对血管损伤;
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