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以银杏提取物为唯一碳源,利用栀子苷—谷氨酸钠显色法,从银杏树下土壤样品中筛选产β-葡萄糖苷酶的菌株。采用3,5二硝基水杨酸法(DNS法)测定菌株的β-葡萄糖苷酶酶活。对所筛选出菌株产生的β-葡萄糖苷酶进行提纯以及酶学性质研究。(1)以银杏提取物为唯一碳源,利用栀子苷-谷氨酸钠显色法,从贵州银杏树下土壤样品中分离产水解银杏黄酮的β-葡萄糖苷酶的菌株,共分离出178株具有蓝色菌圈的菌株。(2)经DNS法测定酶活,得到20株酶活较高菌株,其中酶活最高的菌株为NY-13(1.03U/mL),其次为菌株QY2-3(0.88U/mL)。且都对银杏黄酮有一定的作用。(3)经菌落形态、生理生化特征试验及16S rRNA分子生物学鉴定,菌株NY-13为解鸟氨酸柔武氏菌,菌株QY2-3为解淀粉芽孢杆菌。(4)通过单因素优化丙酮沉淀提取β-葡萄糖苷酶,得到菌株NY-13产β-葡萄糖苷酶丙酮提取的最优条件为:粗酶液/丙酮为1:1,沉淀时间为1 h,温度为-18℃,酶活回收率为64.92%,纯化倍数为4.72倍;菌株QY2-3产β-葡萄糖苷酶丙酮提取的最优条件为:粗酶液/丙酮为1:2.5,沉淀时间为1 h,温度为-18℃,酶活回收率为63.8%,纯化倍数为3.49倍。(5)反胶束萃取条件单因素优化,菌株NY-13和QY2-3的最优反胶束萃取条件均为:CTAB浓度为15 mmol/L、盐离子浓度为0.05 mmol/L、水相pH值为8.0、异辛烷/正己醇比例为8:2、有机相/水相比为4:6、萃取温度为30℃。(6)经丙酮沉淀提取及反胶束萃取后,菌株NY-13产β-葡萄糖苷酶的总纯化结果为:总酶活回收率49.18%、总提纯倍数9.2倍;菌株QY2-3产β-葡萄糖苷酶的总纯化结果为:总酶活回收率45.34%、总提纯倍数7.03倍。(7)酶学性质研究,菌株NY-13产β-葡萄糖苷酶对底物龙胆二糖的专一性较强,不能水解苦杏仁苷;作用的最适pH值为5.0,最适温度为50℃;在pH4.0~6.0之间酸耐受性较好,在pH4.0~6.0条件下于4℃放置24 h后,仍有90%以上的酶活;在30~50℃之间热稳定性较好,在pH5.0条件下于30~50℃放置24 h后,仍有90%以上的酶活;Co2+能促进其水解作用,而Fe3+对其抑制作用较强。(8)QY2-3产β-葡萄糖苷酶对底物龙胆二糖的专一性较强,不能水解苦杏仁苷;作用的最适pH值为5.0,最适温度为50℃;在pH4.0~6.0之间酸耐受性较好,在pH4.0~6.0条件下于4℃放置24 h后,仍有90%以上的酶活;在30~50℃之间热稳定性较好,在pH5.0条件下于30~50℃放置24 h后,仍有90%以上的酶活;Co2+能促进其水解作用,而Fe3+对其抑制作用较强。