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第一部分TNF-α-308 G/A多态性与结直肠癌和乳腺癌患病风险的研究[目的]TNFα是一个炎症相关的细胞因子,它参与多种癌症的发生发展过程。目前TNF-α-308G/A的多态性与结直肠癌(CRC)和乳腺癌(BRC)的相关性尚不完全清楚,尤其是与CRC、BRC的临床特征、实验室指标的关联性尚未有深入的研究。本实验中,综合CRC和BRC各自的特点,把疾病分为不同的亚型、将传统组织病理学分型与基因分型相结合,研究TNFα基因多态性与CRC和BRC发生与转移的风险从而指导个体化的诊断与治疗。[方法]研究收录昆明医科大学第一附属医院和云南省肿瘤医院570例CRC、490例BRC患者及相应的无病对照。收集相应的人口学资料和临床资料;对照组收集人口学资料。采用高通量时间飞行质谱生物芯片系统检测实验对象TNFα的单核苷酸多态性(SNP)。通过比较病例组与对照组人口学特征、CRC和BRC各亚型间的临床特征和实验室指标及各等位基因分布频率的差异,计算OR及95%CI,从而比较不同基因型与CRC和BRC发生及转移的相对危险度。[结果]TNFα基因rs1800629位点检测到GG、AA及GA三种基因型。结直肠癌中,年龄和性别在病例组和对照组中满足频率匹配(P=0.46&0.77),TNF-α-308 G和A的等位基因频率符合哈迪温伯格平衡定律(PHWE=0.85&0.67)。BRC中病例组和对照组之间的年龄分布无显著差异(P=0.065),G和A的等位基因频率符合哈迪温伯格平衡定律(PHWE=0.87&0.96)。在所有的CRC患者中,TNF-α-308 G>A 增加了 CRC 患者远处转移的风险(OR=2.911,95%CI:1.697-4.992,P= 0.00017),经多因素Logistic回归分析,该数值仍具有显著的差异(OR=2.947,95%CI:1.515-5.572,P=0.00121)。有趣的是,将CRC分组后,我们发现GA和AA仅仅是直肠癌远处转移的危险因素(OR=4.481,95%CI:2.072-9.693,P=0.00025)而和结肠癌的远处转移发生没有确切相关性(OR=1.685,95%CI:0.592-4.796),校正所有临床资料后该数值仍具有显著的差异(OR =7.099,95%CI:2.482-20.301,P= 0.000256)。GA和AA基因型是CRC患者发生肥胖、肿瘤体积增大的危险因素,携带GA和AA基因型的患者的肥胖风险较携带GG基因型增加(OR = 2.056,95%CI:1.197-3.530,P=0.01);携带 GA 和 AA 型的 CRC 具有更大的肿瘤体积(OR=2.225,95%CI:1.049-4.719,P=0.044)。TNF-α-308 G>A是CRC患者中性粒细胞增高的危险因素(OR= 4.764,95%CI:2.39-9.495,P=0.000012)。BRC患者中,GA和AA基因型是肿瘤体积的保护因素,携带GA和AA基因型的BRC患者肿瘤体积相对较小(OR = 0.137,95%CI:0.019-1.013,P=0.023),经多因素Logistic回归分析后,结果仍然有意义(OR = 0.115,95%CI:0.013-0.991,P=0.023)。在TNBC中,GA和AA基因型更频繁的出现于初潮年龄大于15岁的患者(OR =11.75,95%CI:1.761-78.416,P=0.003)及罹患高血压的患者中(OR=8,95%CI:1.02-62.737,P=0.025)。在 Luminal-A 型患者中,右侧乳腺癌的GA和AA基因型频率较高(OR=5.073,95%CI:1.022-25.194,P=0.031),HER-2患者中,具有GA和AA基因型的患者初次诊断乳腺癌的年龄偏大(OR= 1.211,95%CI:1.004-1.46,P=0.029)。通过比较实验室指标基因型的分布差异,揭示了 GA和AA基因型与白蛋白和胆固醇水平的相关性,TNF-α-308 G>A 是 BRC 低蛋白血症(OR= 2.571,95%CI:1.194-5.535,P=0.013)及 TNBC高胆固醇血症(OR= 7.75,95%CI:0.842-69.708,P=0.041)的危险因素。[结论]TNF-α-308 G>A多态性是CRC发生远处转移的危险因素,尤其增加了直肠癌患者发生远处转移的风险,而和乳腺癌的复发转移没有明显相关性,GA和AA基因型是CRC患者发生肥胖、肿瘤体积增大的危险因素,提示TNFα基因rs 1800629位点是影响CRC预后的重要因素之一。GA和AA基因型增加了BRC低蛋白血症和TNBC高胆固醇血症、TNBC罹患高血压及Luminal-A患者右乳癌的患病风险,具有GA和AA基因型的患者有较小的肿瘤体积,提示TNF-α-308 G>A的多态可以预测肿瘤的原发部位、大小及评估BRC的营养状况。第二部分Dexamethasone诱导三阴性乳腺癌耐药的机制研究[目的]研究地塞米松(Dex)在促进三阴性乳腺癌(TNBC)耐药中的机制[方法]用SRB实验检测Dex对TNBC细胞经化疗药物顺铂(Cpt)、多西他赛(DTX)处理后对生长、增殖的影响;用免疫印迹实验检测糖皮质激素(GCs)对KLF5蛋白的诱导,以及相关凋亡蛋白的检测;用real-time PCR、双荧光素酶报告基因实验检测地塞米松对KLF5的转录活性的影响;用ChIP实验验证糖皮质激素受体(GR)对KLF5启动子调控的具体位点;用流式细胞仪检测Dex通过KLF5介导的TNBC细胞凋亡的影响;用裸鼠成瘤实验在体内证明Dex在TNBC对DTX敏感性中的影响。[结果]Dex可以促进TNBC细胞HCC1937和HCC1806的生长和增殖,同时我们发现其诱导KLF5在乳腺癌细胞系中的表达;在TNBC细胞中,Dex可以促进KLF5的转录活性,活化GR并促其结合至KLF5启动子区域的Sp1位点,增强KLF5的启动子的活性,进而促进KLF5的转录表达;敲低KLF5能够抑制三阴性乳腺癌细胞的存活;KLF5介导了 Dex对DDTX和Cpt引起的细胞凋亡的抑制作用;Dex降低了乳腺肿瘤在动物体内对化疗药物的敏感性,而沉默KLF5表达则回复了肿瘤对DTX的敏感性;这些结果说明Dex至少部分通过KLF5调控三阴性乳腺癌细胞对DTX和Cpt的耐药。[结论]我们证实了 Dex通过GR调控下游靶基因KLF5的转录,进而促进TNBC细胞的增殖;Dex通过KLF5的表达,进而促进了 TNBC对化疗药物的耐药。说明,KLF5是三阴性乳腺癌治疗和预测疗效潜在的靶点和生物标记物。