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目的:Wnt/β-catenin信号转导通路异常激活可导致胚胎发育异常和肿瘤发生,如该通路的核心分子β-catenin异常表达与肝癌发生有关。富含半胱氨酸61(cysteine rich 61, Cyr61/CCN1)是一种细胞外基质相关蛋白,可发挥多种生理功能,包括介导细胞外基质的形成、细胞增殖、分化和黏附、促进细胞迁移和血管形成。肝癌组织和细胞中Cyr61的异常表达与β-catenin的异常激活呈正相关。本研究首先检测了Cyr61在人类肿瘤组织中的表达情况,进而以肝癌细胞株HepG2为模型,研究过表达外源性β-catenin和RNA干扰抑制内源性β-catenin表达时及dnTcf4抑制β-catenin/Tcf4复合物转录活性,对Cyr61表达的影响;CHIP实验和荧光素酶报告基因检测研究β-catenin对Cyr61的直接调控作用。通过研究为探讨肝癌发生中β-catenin是否调控了Cyr61表达,为进一步揭示Cyr61在肝癌发生中的作用和机制奠定基础,为肿瘤诊断与治疗提供新的肿瘤标志物和基因治疗靶点。方法:1.采用HE染色、免疫组化的方法检测人体多系统肿瘤组织芯片和30例肿瘤组织标本(包括食道癌、胃癌、直肠癌、肺癌、乳腺癌和肝癌组织标本各5例)中Cyr61蛋白的表达情况。2.重组腺病毒Adβ-catenin感染肝癌细胞株HepG2,获得过表达外源性β-catenin的HepG2细胞模型并观察对Cyr61表达的影响。3.HepG2细胞中以siRNA技术沉默编码β-catenin的基因CTNNB1,RT-PCR和Western-blot方法检测Cyr61表达的变化。4.dnTcf4失活策略抑制HepG2细胞中β-catenin/Tcf4复合物的转录活性,观察对Cyr61表达的影响。5.CHIP实验研究β-catenin对Cyr61的直接调控作用。6.扩增Cyr61启动子中包含TBE位点的片段,构建荧光素酶报告基因重组体pGL3-TBE。7.腺病毒Adβ-catenin和AdGFP联合重组体pGL3-TBE,通过荧光素酶报告基因检测研究β-catenin对Cyr61启动子的调控作用。结果:1.组织芯片中77%(38/48)的肿瘤组织Cyr61表达阳性,93%(28/30)肿瘤组织标本中Cyr61表达阳性,神经、食管和甲状腺等的肿瘤组织中表达强阳性,胃、肝、结肠、直肠、肺、肾、子宫、皮肤、卵巢、乳腺癌等肿瘤组织中呈阳性表达,膀胱、前列腺和胰腺癌等肿瘤组织中表达弱阳性。2.Adβ-catenin感染的HepG2细胞与AdGFP感染的HepG2细胞相比,感染48h后,随着β-catenin的表达增强,Cyr61表达也随之增强。3.Adsi-β-catenin感染的HepG2细胞与AdSES-hus感染的HepG2细胞相比较,感染48h后,随着β-catenin的mRNA和蛋白表达下调,Cyr61的mRNA和蛋白表达也明显下调。4.AddnTcf4感染的HepG2细胞与AdGFP感染的HepG2细胞相比,在感染30h后,β-catenin/Tcf4复合物的转录活性受到明显抑制,在感染48h后,Cyr61蛋白表达明显下调。5.CHIP实验显示:HepG2细胞中β-catenin信号通路可以直接和Cyr61启动子结合。6.荧光素酶报告基因检测表明β-catenin信号通路可以对Cyr61启动子起直接调控作用。结论:1.Cyr61在多数肿瘤组织中均过表达,在不同肿瘤组织中表达程度不同,Cyr61可能做为新的标志物而用于多种肿瘤的诊断。2.研究结果表明肝癌细胞HepG2中Cyr61是β- catenin的又一新的靶基因,肝细胞癌中过表达Cyr61由β- catenin信号的异常激活而诱导的,二者可能共同参与了肝癌的发生发展。