前言流行性感冒是由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道传染病,是对人类健康威胁最大的传染病之一。其发病率居传染病首位。迄今为止最有效的防治流感病毒的手段是接种流感疫苗。目前尚缺乏可靠的方法对流感发生与流行的周期性进行有效预测,这给流感疫苗的生产带来困难。因此抗流感病毒物质的研究,是目前各国研究的重点。蛋氨酸脑啡肽（Methionine Enkephalin,MEK）是哺乳动物体内自然生成的,由肾上腺产生的前激素和前脑啡肽衍生而来。已有研究表明人体内免疫细胞广泛存在MEK受体,适宜浓度MEK能通过与受体作用显著提高机体免疫功能。MEK在流感病毒感染的小鼠中能显著增加体液免疫和细胞免疫功能,MEK与其它抗病毒药合用能治疗病毒性肺炎,显著延长受感染动物的生存期。MEK可以推迟HIV感染者病程,减轻症状,增加体内的CD4⁺T细胞、NK细胞数量,CTL细胞的活性,增加IL-2、干扰素等细胞因子的产生。有人把它称作治疗性疫苗。本研究通过实验探讨MEK抗B型流感病毒感染的作用,为MEK作为预防流感疫苗的应用提供理论依据。材料和方法一、实验材料1、主要试剂及药品:MEK:批号:63231,分子量:574,美国Penta-biotech。2、B型流感病毒液（滴度为1∶64）,由辽宁省CDC保存并传代毒株。3、鸡胚:8-11日龄鸡蛋由辽宁省朝阳北票种鸡厂提供。4、狗肾细胞系（Medin-Darby canine kidney,MDCK）细胞:孵育培养24小时的第17-18代MDCK单层细胞由辽宁省CDC传代细胞系。二、实验方法1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK细胞实验试验分组:MEK设10^-5,10^-6,10^-7,10^-8,10^-9,10^-10,10^-11,10^-12,10^-13,10^-14mol/L等浓度组,每组设4孔平行实验,同时设空白对照和病毒对照。空白对照组:加入200ul病毒维持液。病毒对照组:加入100TCID50流感病毒和病毒维持液各100ul,其余各组按不同的先后次序分别加入MEK和100TCID50 B型流感病毒各100ul,在34℃5%CO₂孵育72小时后观察细胞病变,置于-70℃冻融后做血凝实验。2、MEK抗B型流感病毒感染鸡胚实验试验分组:根据预实验设MEK 10^-12mol/L,同时设空白对照和病毒对照。空白对照组加入200ul生理盐水,病毒对照加入100EID50流感病毒和生理盐水各100ul,10^-12mol/LMEK组按不同的先后次序分别加MEK和100EID50 B型流感病毒各100ul,在34℃孵育72小时,置于-20℃1小时取尿囊液做血凝实验。实验结果1、MEK抗B型流感病毒感染MDCK细胞实验空白对照组无细胞病变,无血凝。病毒对照和其他组均出现细胞病变,病毒滴度为1∶64。2、MEK抗B型流感病毒感染鸡胚实验空白对照组无血凝;病毒对照组HA滴度为1∶64;先注射10^-12 Mol/L MEK温育24小时后再注入B型流感病毒组,HA滴度为6.8±1.93与病毒对照组比较P＜0.01有统计学意义。讨论MEK是参与神经系统、内分泌系统及免疫系统调节的重要物质。研究证明T淋巴细胞、巨噬细胞,自然杀伤细胞（NK）等均含有MEK受体,适宜浓度的MEK与受体结合具有激活免疫细胞作用,特别是增加T淋巴细胞活性。通过MEK抗B型流感病毒感染实验,未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用但可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用,表明了MEK可能通过免疫系统调节增加干扰素,白介素等多种细胞因子的产生,这些因子在病毒复制周期中的一个或多个环节,作用于靶细胞,通过阻滞病毒复制,或通过诱导一系列抗病毒蛋白质干扰其复制,或抑制病毒生活周期中的某些关键成分,增强机体的抗病毒的能力,具体机制正在进一步深入研究之中。本研究为MEK将来作为人类非特导性保护性疫苗,提供重要的实验模型。结论1、本实验结果未见MEK直接抗B型流感病毒感染MDCK细胞株的作用。2、本实验可见MEK抗B型流感病毒感染鸡胚的作用