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肝细胞癌是世界上最常见的致死性恶性肿瘤之一，我国原发性肝细胞癌年发病率居全球之首，其手术切除率低，术后复发率高及死亡率高，对放化疗不敏感，临床缺乏有效的治疗手段，严重威胁着人民的健康。TRAIL是近年来发现的TNF超家族的又一成员，能够通过死亡受体活化途径诱导大多数肿瘤细胞如乳腺癌细胞，膀胱癌细胞，神经胶质瘤细胞等发生凋亡。肝癌即使得到根治性切除后，微量残留的肿瘤细胞仍能逃避免疫监视和免疫杀伤，并迅速复发，其重要原因就是肝癌细胞对以TRAIL为代表的经由死亡受体传导通路诱导的凋亡作用产生抵抗，其耐药机制尚不明确。A20最早在TNF、IL-1或LPS刺激后的人脐静脉内皮细胞中被发现。越来越多的证据支持，A20依赖对靶蛋白的泛素化修饰来调节细胞免疫和炎症反应。A20作为联系基因多态性与多种自身免疫性疾病（包括克罗恩病，系统性红斑狼疮，类风湿关节炎，1型糖尿病）的关键蛋白，也折射出其调节免疫稳态的重要性。A20还可以负性调控NF-κB信号通路来行使其抗炎作用。此外，越来越多的研究表明，A20在一些淋巴瘤中扮演着抑癌基因的角色。然而，A20也可以降低TNF介导的细胞凋亡和坏死，并且在肉瘤中A20的过表达甚至可能介导了TRAIL的耐受，但其具体作用尚不清楚。在本研究中，我们发现，A20在肝癌组织和肝癌细胞系中都存在高表达，并参与了肝癌细胞对TRAIL的抵抗，联合应用TRAIL及A20基因沉默技术可抑制肝癌细胞生长并诱导TRAIL耐受肝癌细胞凋亡，从而为联合应用TRAIL和A20基因沉默技术或A20靶向抑制剂提供了实验依据。本研究主要应用细胞培养、酸性磷酸酶法、siRNA技术、流式细胞术、shRNA技术、Western blotting等，研究了人肝细胞癌组织和肝癌细胞系中的A20的表达及激活情况，应用TRAIL处理A20沉默或A20敲除的肝癌细胞系对肝细胞癌生长抑制作用、细胞周期影响和凋亡传导通路各蛋白表达情况影响。本研究旨在探讨联合应用TRAIL及A20基因沉默技术对肝癌细胞生长抑制和诱导凋亡的效果，并进一步探讨联合TRAIL和A20基因沉默技术增强肝癌细胞凋亡的分子机制，为肝细胞癌靶向治疗提供理论基础和实验依据。人肝癌组织及相关肿瘤细胞系中A20表达的检测结果如下：（1）A20在肝细胞癌组织标本中存在高表达，在正常肝组织中无表达或低表达。（2）A20在神经胶质瘤细胞系LN18中不表达，在结肠癌细胞系HCT-8和HT-29中低表达，在结肠癌细胞系DLD-1中中度表达，在神经胶质瘤细胞系LN443、肝癌细胞系HepG2和Hep3B中存在高表达。（3）A20在不同肿瘤中的表达情况存在组织和细胞类型的特异性，依据A20作为肿瘤分子治疗靶点的前提是针对特定肿瘤进行A20个性化机制研究。A20沉默增加肝癌细胞对TRAIL敏感性的实验研究结果如下：（1）TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡被阻滞在caspase-8水平，A20-siRNA预处理后增加HepG2和Hep3B细胞对TRAIL的敏感性。（2）A20-siRNA与TRAIL联用在诱导肝癌细胞凋亡上有显著的协同作用，能有效逆转肝癌细胞对TRAIL的抵抗诱导凋亡。（3）A20-siRNA与TRAIL联用在诱导肝癌细胞凋亡机制是通过下调A20的表达，解除A20对RIP1的泛素化修饰，联合TRAIL可协同作用激活RIP1产生裂解带，逆转RIP1对caspase-8的抑制作用，进而解除RIP1对caspase-8蛋白酶体结构域的抑制作用，激活下游caspase-3，活化TRAIL诱导的死亡受体传导通路来实现的。A20对肝癌细胞生长作用的研究结果显示：（1）TRAIL在A20敲除HepG2和Hep3B细胞系中诱导凋亡的作用呈剂量依赖性。（2）A20介导的RIP1泛素化阻断TRAIL在肝细胞癌中诱导的caspase-8活化，而A20敲除则迅速逆转RIP1泛素化过程以增强TRAIL诱导的细胞凋亡。A20依赖性的RIP1泛素化可能是介导TRAIL凋亡耐受的一个重要机制。（3）A20敲除抑制早期传代肝癌细胞系的生长，并促使早期传代肝癌细胞系HepG2发生明显的形态学改变。A20参与了肝癌细胞的生长调控和形态学变化。本研究的主要创新点：（1）验证了A20和凋亡信号传导通路在肝癌组织和肝细胞癌细胞系中的表达情况，阐明了A20在不同肿瘤中的表达情况存在组织和细胞类型的特异性。（2）分子水平阐明了TRAIL诱导肝癌细胞凋亡受抑的分子机制；分析了A20参与肝癌细胞的生长调控和形态学变化的现象。（3）阐明了A20在肝细胞癌对TRAIL抵抗中的作用及联合应用TRAIL和A20沉默更好地抑制肝癌细胞生长、促进肝癌细胞凋亡的分子生物学机制。综上所述，A20在肝癌组织和肝癌细胞系中都存在高表达，A20在不同肿瘤中的表达情况存在组织和细胞类型的特异性。TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡被阻滞在caspase-8水平，A20参与了肝癌细胞对TRAIL的抵抗。A20基因敲除后增加HepG2和Hep3B细胞对TRAIL的敏感性，与TRAIL联用在诱导肝癌细胞凋亡上有显著的协同作用，能有效逆转肝癌细胞对TRAIL的抵抗诱导凋亡，且TRAIL诱导凋亡的作用呈剂量依赖性。A20基因敲除与TRAIL联用诱导肝癌细胞凋亡机制是通过下调A20的表达，解除A20对RIP1的泛素化修饰，联合TRAIL可协同作用激活RIP1产生裂解带，逆转RIP1对caspase-8的抑制作用，进而解除RIP1对caspase-8蛋白酶体结构域的抑制作用，激活下游caspase-3，活化TRAIL诱导的死亡受体传导通路来实现的，A20依赖性的RIP1泛素化可能是介导TRAIL凋亡耐受的一个重要机制。同时A20还参与了肝癌细胞的生长调控和形态学变化。因此，联合使用TRAIL和A20基因沉默技术或靶向抑制剂可以更好的抑制肝癌细胞生长，激活下游凋亡传导通路诱导凋亡，为肝细胞癌的治疗提供了新的思路和方法。