用RNA干扰技术沉默AtTPS03基因的研究

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AtTPS03是AtTPS基因家族中的一员,它能编码单萜合酶,而这种单萜合酶能高特异性催化香叶基二磷酸成Ocimene。空气传播的Ocimene能作为一种气传信号分子,在不同的植物体之间起着化学通讯的作用。最近研究表明:β—Ocimene在植物防御中起着重要作用,能解除水杨酸和茉莉酸的拮抗作用。Ocimene作为植物体内合成的物质,除了在防御反应中起着重要作用以外,是否对植物的生长发育还有其他的作用?其研究仍是一片空白。本研究通过对拟南芥中AtTPS03基因进行沉默研究,分析植物体在Ocimene缺失的情况下,对植物生长发育的影响,获得了如下试验结果:1.克隆了AtTPS03基因片段,测序结果与Genebank上报道的序列同源性达到99%;然后,将扩增出的AtTPS03基因片段正反向连接到质粒pFGC5941上,经菌落PCR、质粒PCR、酶切等验证,发现正反向基因片段已经插入到载体中,成功构建AtTPS03基因的RNA干扰载体。2.通过根癌农杆菌LBA4404的介导作用,利用浸花法将构建好的干扰载体转化到拟南芥中,并得到大量转化子;确定了转化子的最适PPT筛选浓度为0.7mg/L。3.利用PPT筛选转化子,得到大量抗性苗,经分子检测已成功获得10株转基因植株。4.对转基因植株的表型进行观察与分析,发现转基因植株叶的形态与野生型存在明显差异,其叶缘呈明显的波状。
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