肠道特异性转录因子CDX2是调节肠道细胞增殖和发育的关键因素,它在肠道中大量表达。对于CDX2的研究,有助于我们深入了解草鱼肠道发育的分子机理。本研究从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道中克隆了CDX2的cDNA序列,并研究了CDX2在草鱼不同组织中的表达。采用Real time PCR技术在基因表达水平上对CDX2基因在草鱼胚胎发育和生长发育过程中表达量的变化进行了研究分析。此外,我们还扩大了我们的研究,以了解饲料中的蛋白质对鱼类的影响。这些工作为我们对鱼类饲料营养的研究奠定了基础。1、CDX2cDNA基因全长克隆及序列分析在我们的研究中,采用RT-PCR、RACE等技术,从草鱼肠道中克隆了CDX2基因全长序列,使用生物信息学软件对其序列进行分析,结果表明：该基因全长1318bp,包括112bp5’UTR、449bp3’UTR和777bp的编码区,编码的CDX2蛋白含有258个氨基酸,系统进化分析显示和脊椎动物有很高的相似性,与斑马鱼(Danio rerio)的亲缘关系最近。分子量为28.93ku,等电点为10.09。CDX2基因其DNA分子量为481.597ku；各碱基含量分别为A:417, C:302, G:290, T:309,所占百分含量分别为31.6%、22.9%、22.0%和23.4%。2、草鱼CDX2基因时空表达分析采用Real time PCR技术对CDX2基因在草鱼不同组织、胚胎及幼年发育过程中表达量的变化进行研究分析。组织差异表达,结果显示CDX2基因在草鱼的肠道中表达最高,在其他组织中无表达。胚胎发育过程中,在囊胚期、原肠期和神经期表达量很低,到器官期肠道开始形成,表达也开始提高,从器官期到出膜第4d呈现递增的趋势；幼鱼的发育过程中,不同发育阶段CDX2mRNA的表达量大致趋势是逐渐增加,到第42d和第49d的时候表达量达到最高。3.不同蛋白水平和蛋白源饲料对草鱼肠道CDX2基因表达的影响我们设计了三种不同蛋白源和四种不同蛋白水平的两组实验饲料喂养草鱼。应用Real time PCR技术来检测草鱼肠道CDX2mRNA基因的相对表达量,不同蛋白源对草鱼肠道CDX2mRNA表达影响的养殖实验表明,随着饲养时间的增加草色CDX2mRNA的相对表达丰度也是呈上升趋势的,在三组不同的蛋白源中豆粕组的CDX2A mRNA表达量比鱼粉组和混合组要高。不同蛋白水平对草鱼肠道CDX2mRNA表达影响的养殖实验表明,不同时间段不同蛋白水平从27%CP到37%CP草鱼肠道CDX2mRNA相对表达丰度是一种升高趋势,而从37%CP到42%CP CDX2mRNA相对表达丰度呈现一种降低趋势。在37%CP组各时间段均显著高于其他各蛋白水平组(p<0.05)。