当前,体内药物分析依然面临复杂基质成分的挑战。随着超高压液相色谱、高灵敏度质谱检测技术的普及,分离、检测技术有了长足发展,然而体内生物样品的前处理依然处于制约状态。固相萃取(SPE)是当前生物样品快速前处理的主流技术。多数SPE技术所采用的的萃取介质为疏水性材料,在处理体内生物样品(如血浆或血清)时,常常需要事先除去血浆蛋白,防止蛋白分子在萃取介质表面的永久性吸附。这样使得样品前处理过程变得步骤繁琐、冗长,还会造成目标分析物的损失,降低检测灵敏度。因此,发展能直接处理血浆(或血清、全血)的具有蛋白分子限进功能的新型SPE萃取介质已成为目前体内生物样品分析的研究热点之一。本论文针对实现快速、高效地从血浆中直接萃取、富集(疏水、离子型)中药活性成分为目标,开展了限进性吸管整体柱的制备、以及用于直接SPE处理大鼠血浆样品的应用研究,并取得了令人满意的结果。本论文主要研究内容如下:1、引言介绍了本论文的研究背景和目的。着重阐述了当前SPE、限进性SPE前处理技术的发展状况,电子转移再生催化剂的原子转移自由基聚合(ARGET-ATRP)技术特点,以及定向冷冻聚合法制备大孔聚合物材料的技术现状等。最后提出了本论文研究的设计思路,确定在移液吸管内合成具有限进功能表面的聚合物整体柱,将其应用于大鼠血浆样品的便捷、高效SPE前处理。2、直孔限进吸管整体柱的制备将苯乙烯(ST)作为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)作为交联剂,二甲基亚砜(DMSO)/N,N-二甲基甲酰胺(DMF)作为溶剂,通过定向冷冻状态下的ARGET-ATRP反应,在1000μL聚丙烯吸管内合成大直孔疏水性整体柱,进一步利用ARGET-ATRP将甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)接枝到疏水整体柱表面,形成线性聚甲基丙烯酸羟乙酯(p-HEMA)链,最终得到表面有长亲水链的限进整体柱吸管。该限进整体柱内部沿冷冻方向形成直径达几十微米级的长微管,这些长的微管为血浆蛋白分子的顺利通过提供了可能。微管内壁表面的p-HEMA链则提供了蛋白分子限进功能,只有那些小分子药物成分才能渗透进入表面内部,与苯基功能基团发生相互作用而被保留。该限进整体柱吸管可通过一锥形适配管与2mL一次性注射器联接,组装成便捷的SPE装置,通过手动操作排液,快速完成大鼠血浆样品的直接SPE处理。该限进整体柱截面采用扫描电镜进行了表征,柱体化学成分用红外光谱、X射线能谱进行了表征。以厚朴酚与和厚朴酚为目标成分,结合HPLC/UV分析,检验了整体柱对疏水性组分厚朴酚与和厚朴酚的吸附能力、以及蛋白排阻效率。3、直孔限进整体柱吸管用于从大鼠血浆中直接同时萃取厚朴酚与和厚朴酚利用自制的便捷限进整体柱吸管SPE装置从大鼠血浆样品中直接同时萃取厚朴酚与和厚朴酚,后续结合HPLC/UV分析,构建了限进吸管整体柱SPE-HPLC/UV新方法,实现对大鼠血浆样品中的厚朴酚与和厚朴酚的同时快速分析。实验过程中,对限进整体柱吸管SPE处理大鼠血浆的操作条件进行了优化。配制含有厚朴酚与和厚朴酚的4个浓度水平的大鼠血浆质控样品,进行了方法学验证,考察了方法选择性、以及样品稳定性条件;并将该方法应用于厚朴提取物灌胃大鼠血浆实际样品的检测和加标回收,取得了满意的结果。厚朴酚(62.94～5035.00 ng/mL)与和厚朴酚(62.62～5010.00 ng/mL)在各自的浓度线性范围内呈现良好的线性,相关系数r分别为:0.9988(厚朴酚)、0.9996(和厚朴酚);精密度RSD在3.39%～11.16%范围内,相对回收率为89.52%～108.42%。实验表明,该方法的重现性和回收率良好,未来也可应用于其它疏水性药物的体内分析。4、直孔限进整体柱吸管用于从大鼠血浆中直接同时萃取防己诺林碱和粉防己碱基于自制的便捷限进整体柱吸管SPE装置,从大鼠血浆样品中直接同时萃取防己诺林碱与粉防己碱,联合HPLC/UV分析,构建了RA-SPE-HPLC/UV同时测定大鼠血浆样品中防己诺林碱与粉防己碱的新方法。在优化的SPE操作条件下,对防己诺林碱和粉防己碱4个浓度水平的大鼠血浆质控样品进行了方法学验证,考察了方法选择性、以及样品稳定性条件。防己诺林碱与粉防己碱分别在80.48～8048.00ng/mL和80.96～8096.00 ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性,相关系数r分别为0.9988(防己诺林碱)和0.9991(粉防己碱);精密度RSD在3.97%～8.06%范围内,相对回收率为87.52%～99.15%。该分析方法成功应用于实际大鼠血浆样品的检测,效果较好。5、可置换弱阳离子交换直孔限进整体柱的制备及其用于从大鼠血浆中直接同时萃取黄连碱和小檗碱将弱阳离子交换剂苯甲酸通过π-π相互作用力吸附在疏水的限进整体柱上,就将功能基团为苯基的直孔限进整体柱转变为弱阳离子交换直孔限进整体柱。利用该自制的弱阳离子交换限进整体柱直接从大鼠血浆中萃取极性生物碱(黄连碱和小檗碱),联合HPLC/UV分析,构建新的弱阳离子交换限进SPE-HPLC/UV方法,同时分析大鼠血浆中的黄连碱和小檗碱。在优化的SPE条件下,对4个浓度水平的大鼠血浆质控样品进行了方法学验证,考察了方法选择性、精密度以及准确度条件。黄连碱与小檗碱分别在在50.70～10140.00ng/mL和50.90～10180.00 ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性,相关系数r分别为0.9995(黄连碱)和0.9997(小檗碱);精密度RSD为3.62%～10.14%范围内,相对回收率为87.10%～104.24%,并用于给药大鼠血浆的检测,取得良好效果。