【摘 要】
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该文用亚克隆的方法构建了两个重组表达质粒.以PXJ41-neo为载体构建了即可用于原核表达又可用于真核表达的重组质粒PXJ41-neo+α-MHC.以带绿色荧光蛋白标记的pEGFP-c1为载体
【出 处】
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华西医科大学 四川大学华西医学中心 四川大学
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该文用亚克隆的方法构建了两个重组表达质粒.以PXJ41-neo为载体构建了即可用于原核表达又可用于真核表达的重组质粒PXJ41-neo+α-MHC.以带绿色荧光蛋白标记的pEGFP-c1为载体构建了用于真核表达的重组质粒pEGFP-cl+α-MHC.用脂质体介导转染法将重组质粒导入培养的CHO细胞中,经G418筛选获得抗性细胞株,用斑点杂交和Western印迹对α-MHC基因在CHO细胞中的表达进行了检测.两种方法检测的结果是一致的,证实大鼠α-MHC基因能够有效表达.把重组质粒PXJ41-neo+α-MHC转入大肠杆菌JM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,未能获得相应的蛋白产物,提示大鼠α-MHC基因在此系统中不能有效表达.该实验为进一步研究心肌收缩蛋白奠定了一些基础.
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