背景：随着对支气管哮喘临床与机制的深入研究，发现近半数的哮喘患者表现为非嗜酸性粒细胞型哮喘（non-eosinophilic asthma，NEA），其气道炎症以多形核中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）浸润为主，往往对糖皮质激素（glucocorticoids，GC）治疗不敏感。IL-17是一种重要的前炎症因子，可刺激效应细胞表达多种PMN的趋化因子，引起PMN的聚集及炎症反应。因此，阻断IL-17A或可减轻NEA气道炎症。我们已成功构建了rMS-Ag85a-IL-17a疫苗，并证明该疫苗可诱导生成IL-17A自身抗体，在重症哮喘模型的治疗中取得了相当的疗效。本实验拟构建小鼠NEA模型，进一步研究rMS-Ag85a-IL-17a拮抗NEA气道炎症的作用与相关机制。　　目的：rMS-Ag85a-IL-17a免疫小鼠，诱导生成IL-17A自身抗体，体外提取纯化，探讨其抑制PMN的功能及抗NEA的气道炎症的作用与机制。　　方法：本实验分四部分：（1）NEA模型的复制建立及 PMN的作用：以DO11.10小鼠复制建立NEA模型，观察PMN在NEA和EA模型中的作用。肺泡灌洗液（BALF）分类计数，观察PMN数目；ELISA法检测BALF中IL-4、IFN-γ、IL-17A、IL-6、CXCL-1、CXCL-2的表达水平；RT-PCR检测肺组织中ENA-78、NAP-2、NE的mRNA表达情况；测定BALF及肺组织中MPO活性。（2） rMS-Ag85a-IL-17a免疫方案的建立及提取纯化 IL-17A自身抗体：rMS-Ag85a-IL-17a经鼻腔免疫小鼠，ELISA法动态检测血清IL-17A自身抗体的滴度，在表达高峰时段分次大量提取血清，蛋白质A亲和层析法纯化IL-17A自身抗体，紫外分光光度法测定纯化抗体的浓度，SDS-Page鉴定抗体的完整性和稳定性，ELISA法测定抗体的活性。（3）IL-17A自身抗体抑制PMN趋化：Transwell下室接种RAW264.7细胞，商品化IL-17A重组蛋白刺激，纯化的IL-17A自身抗体进行阻断，上室加入提取的小鼠外周血 PMN，MTT法间接测量穿过小室的PMN数目，ELISA法测定细胞培养上清中CXCL-1、CXCL-2的分泌水平，结果与PBS组、IL-17A组及IL-17A自身抗体组进行比较，观察IL-17A自身抗体抑制PMN的趋化作用，Western blot检测IL-17A自身抗体对趋化因子转录途径的影响。（4）rMS-Ag85a-IL-17a抗NEA气道炎症反应的作用与机制：DO11.10小鼠分为对照组、哮喘组、ICS组、rMS-Ag85a-IL-17a组及MS组。H&E染色计数BALF中细胞总数及分类计数，ELISA法检测BALF中IL-17A、IL-6、IL-23、CXCL-1、CXCL-2的表达水平；RT-PCR检测肺组织中ENA-78、NAP-2、NE、T-bet、GATA-3、ROR-γt的mRNA表达情况；测定BALF及肺组织中MPO活性；H&E和PAS染色观察小鼠肺组织病理改变。　　结果：（1）DO11.10哮喘小鼠BALF中以PMN增多为主，IL-17A、IL-6、CXCL-1、CXCL-2及肺组织中ENA-78、NAP-2、NE的mRNA表达升高，MPO活性增强。（2）rMS-Ag85a-IL-17a诱导产生的血清IL-17A自身抗体可长期维持较高水平的滴度，纯化后IL-17A自身抗体具备良好的完整性、稳定性及高活性。（3）IL-17A自身抗体能通过拮抗IL-17A，减少IL-17A效应细胞分泌趋化因子从而抑制PMN的聚集。（4）rMS-Ag85a-IL-17a干预NEA小鼠，可明显减少BALF中白细胞总数及PMN数量；降低BALF中IL-17A、IL-6、IL-23、CXCL-1、CXCL-2及肺组织中ENA-78、NAP-2、NE的mRNA表达，抑制MPO的活性，其中肺组织中NE的mRNA表达明显低于ICS组；T-bet、GATA-3、ROR-γt的mRNA表达无明显差异；肺组织病理显示 rMS-Ag85a-IL-17a干预组的气道炎症明显减轻，炎性细胞渗出及气道粘液分泌减少。　　结论：（1）PMN的数量、活性增加是引起 NEA型哮喘气道炎症的主要原因。（2）rMS-Ag85a-IL-17a诱导产生长期高水平的IL-17A自身抗体，IL-17A自身抗体具良好的完整性、稳定性及高活性。（3）IL-17A自身抗体可抑制PMN的趋化作用。（4）rMS-Ag85a-IL-17a免疫后可有效减轻NEA型哮喘小鼠的气道炎症。