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柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)是引起鸡球虫病的病原体中毒力最强的一种寄生虫,给全球养禽业造成了巨大的经济损失。目前对于球虫病的预防和治疗措施主要依靠化学药物,但随着球虫对现有药物耐药性的增强,迫切需要研发新的抗球虫药,而药物靶标的鉴定是其中一个重要步骤。本研究通过双向电泳分析了地克珠利作用后E.tenella第二代裂殖子差异表达的蛋白,筛选出数个药物作用靶标。同时对热休克蛋白(Heat Shock Protein90,Hsp90)及激活蛋白激酶C受体(Receptorfor activated protein kinase C,RACK)进行了分子药理实验。主要结果如下:1.通过双向电泳和Real-time PCR分析了地克珠利作用后,E.tenella第二代裂殖子蛋白表达变化。结果显示,13个蛋白受地克珠利影响显著,其中11个蛋白被鉴定为E.tenella或其它顶复门寄生虫已注释蛋白,这些蛋白与多种生物功能相关,包括:代谢、蛋白质合成及宿主细胞入侵等。利用Real-time PCR检测了上述蛋白mRNA水平,结合双向电泳图谱,进一步阐释了地克珠利对E.tenella第二代裂殖子作用机制,同时说明其中几个蛋白可作为E.tenella感染治疗的药物设计靶标。2.地克珠利在mRNA及蛋白水平上降低了E.tenella第二代裂殖子中Hsp90的表达,同时发现相对于对照组,加药组E.tenella第二代裂殖子中Hsp90的亚细胞定位更趋于分散。此外,体外实验证明地克珠利可直接作用于E.tenella第二代裂殖子Hsp90。综上,实验进一步阐释了地克珠利对E.tenella的分子药理机制,也表明Hsp90是抗球虫感染中一个潜在的药物靶标。3.关于E.tenella第二代裂殖子RACK的实验,通过免疫荧光分析发现,RACK主要表达在E.tenella第二代裂殖子的顶部。此外,通过Western blot和Real-time PCR研究了地克珠利对E.tenella第二代裂殖子的作用,尽管Real-Time PCR结果显示E.tenella第二代裂殖子中mRNA水平在地克珠利作用后有所上升,但在Western blot结果中,处理组的RACK蛋白条带完全消失,且地克珠利作用组的裂殖子在免疫荧光实验中亦未检测到RACK荧光,说明RACK可能是新药设计中一个潜在的药物靶点。综上所述,通过实验,得到了地克珠利作用于E.tenella第二代裂殖子的数个蛋白靶标。同时,地克珠利对E.tenella第二代裂殖子Hsp90和RACK的实验,验证了地克珠利对寄生虫分子伴侣及信号转导途径的作用,说明两者均是良好的药物作用靶标。