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髓系抑制性细胞(MDSC)是一群具有很强免疫抑制功能的细胞,在肿瘤和炎症等疾病的进展和转归过程中起着重要调节作用。但以往的研究主要集中于它们对T细胞和NK等细胞免疫应答的调控作用。它们对于B细胞的功能调控作用还不是十分清楚,尤其是对于调节性B细胞的分化调控作用目前尚未见报道。因此,本研究主要围绕MDSC对调节性B细胞的分化调控及相关的机制进行了探讨。第一部分：MDSC诱导高分泌I]L-10的B细胞产生为了探讨MDSC能否诱导调节性B细胞的分化,我们将小鼠MDSC与不同刺激剂活化的B细胞(anti-IgM、可溶性CD40L、LPS)共培养,检测共培养后上清中IL-10的表达水平。结果发现,经LPS刺激后的B细胞与MDSC共培养后其上清中IL-10的分泌水平明显增高。接着我们通过胞内染色的方法分别检测了共培养前后B细胞及MDSC胞内IL-10表达水平的变化,结果发现共培养之后B细胞胞内IL-10的表达水平明显增高,而MDSC共培养前后IL-10的表达没有明显变化。随后我们将共培养体系中的MDSC与B细胞通过流式分选出来,分别提取其总RNA,利用qRT-PCR的方法检测其IL-10的表达,结果发现,共培养体系中的IL-10主要来源于B细胞。进一步的检测发现该群高分泌IL-10的B细胞表达独特表型即CD19hiFcγRⅡbhi。此外,我们通过流式分选出不同亚群的MDSC(粒系及单核系MDSC),将其分别与LPS活化B细胞共培养,发现不论是粒系MDSC还是单核系MDSC均能诱导LPS活化B细胞高分泌IL-10。另外,我们分选出脾脏不同亚群的B细胞,经LPS活化后分别与MDSC共培养,结果发现,经MDSC诱导后,T1,T2,T3及MZB细胞均能够高分泌IL-10。在体内实验中,我们将CFSE标记的LPS活化B细胞,单独或与MDSC共同尾静脉注射小鼠,取小鼠脾脏,流式胞内染色法检测CFSE+B细胞分泌IL-10的情况,发现在与MDSC共注射的情况下,B细胞分泌IL-10的水平增强。以上结果说明：MDSC能够诱导高分泌IL-10的CD19hiFcγRⅡbhiB细胞产生。第二部分：MDSC的CD19hiFcγRⅡbhi调节性B细胞的功能及其机制研究为了研究MDSC诱导产生的高分泌IL-10的具有CD19hiFcγRⅡbhi表型的B细胞对T细胞是否具有调节功能,我们先通过流式将MDSC与B细胞共培养体系中CD19hiFcγRⅡbhi及CD19lowFcyRIIblowB细胞分选出来,分别与带有CFSE标记且经抗CD3/CD28活化的CD4+T细胞共培养,3天以后检测T细胞增殖情况。结果发现CD19hiFcγRⅡbhiB细胞能够明显抑制活化的CD4+T细胞增殖,且在共培养体系中加入IL-10的中和性抗体后,CD4+T细胞可恢复增殖,这一结果提示CD19hiFcγRⅡbhiB细胞可以通过其分泌的IL-10抑制活化T细胞增殖。另外,我们检测了CD19hiFcγRⅡhiB细胞和CD19lowFcγRⅡblowB细胞对活化CD4+T细胞表面CD69分子表达的影响,结果发现CD19hiFcγRⅡbhiB和CD19lowFcγRⅡblowB细胞对CD69的表达均没有明显影响,以上结果提示CD19hiFcγRⅡbhiB细胞并非通过抑制T细胞活化,而是通过抑制己活化T细胞的增殖发挥调节作用。此外,我们还检测了CD19hiFcγRⅡbhiB细胞和CD19lowFcγRⅡblowB细胞对活化CD4+T细胞分泌IL-4及IFN-γ的影响,结果发现(数据未显示),CD19hiFcγRⅡbhiB和CD19lowFcγRⅡblowB细胞不能影响CD4+T细胞向Thl及Th2方向的分化。在对机制的研究上,首先我们利用transwell系统将MDSC与B细胞隔离,共培养48h后检测上清中IL-10的分泌情况,结果发现,MDSC诱导B细胞产生IL-10。此外,将MDSC培养上清与LPS活化B细胞共培养后,与单独的LPS活化B细胞相比,IL-10的水平也没有明显变化。我们探索了MDSC上哪些膜分子参与诱导了调节性B细胞高分泌IL-10。已有研究表明：CD40L-CD40通路在调节性B细胞的分化中起到着重要作用。通过流式检测我们发现,MDSC表面表达CD40L分子,B细胞表面表达CD40分子,且B细胞经LPS活化后其表面CD40的表达量增加,另外,在B细胞中加入可溶性CD40L可使其上清中IL-10的表达水平增高。下一步我们将用CD40-/-小鼠的B细胞与CD40-/- -小鼠的MDSC共培养,检测上清及胞内IL-10的分泌情况,从而明确CD40L-CD40通路在MDSC诱导高分泌IL-10调节性B细胞产生过程中的作用。总之,本研究发现粒系和单核系MDSC均能够促进LPS活化后的脾脏B细胞分化为高分泌IL-10的,表型为CD19hiFcγRⅡbhi的调节性B细胞,该群B细胞通过其分泌的IL-10抑制活化CD4+T的增殖。本研究提出了MDSC负向调控免疫应答的新机制,即通过促进调节性B细胞的分化从而进一步扩大其独特的免疫负向调节功能,有助于更全面地认识MDSC对免疫应答多细胞网络的负向调控功能,并使我们对调节性B细胞的分化机制和功能特征有更深刻的理解,为探索肿瘤、自身耐受和自身免疫性疾病等的发生机制及免疫治疗的应用提供了新的研究途径。