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研究背景:非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者中针对表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变的表皮生长因子-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)已成为靶向治疗的重要组成部分之一。继一代、二代EGFR-TKIs广泛用于临床之后,三代EGFR-TKIs药物奥希替尼亦日趋成熟。由于该药能够特异性的抑制T790M(+)EGFR突变,最初用于前代TKIs药物耐药后的序贯治疗。而最新的FLAURA研究则显示:较之吉非替尼和厄洛替尼,奥希替尼一线应用更能显著延长EGFR阳性NSCLC患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)。因此,FDA和EMA也批准奥希替尼用于EGFR阳性NSCLC患者的一线治疗。与所有肺癌靶向治疗药物一样,继发性耐药同样是限制奥希替尼临床应用的瓶颈。目前发现,奥希替尼的耐药机制包括EGFR通路依赖型耐药和非EGFR通路依赖型耐药,前者最常见的耐药机制是C797S突变,后者则主要指KRAS、BRAF等旁路途经的激活。对于奥希替尼耐药后的处理目前尚无公认有效的方法,从肿瘤细胞增殖、代谢、凋亡层面探究其普遍性的耐药特征并进行干预是克服耐药策略的重要研究方向。我们团队长期致力于克服肺癌靶向耐药的联合治疗策略的研究,前期成果发现经典降糖药物二甲双胍可以克服肺癌细胞对EGFR-TKIs继发性耐药、干扰肺癌细胞的重要能量来源——“自噬途径”亦能逆转其对靶向药物耐药。这就提示:肺癌细胞对EGFR-TKIs的继发性耐药或许与其能量代谢相关,针对肺癌细胞代谢特点进行干扰或许是克服奥希替尼耐药的可能途径之一。已有研究表明:奥希替尼可以抑制敏感肺癌细胞的糖酵解水平、联用2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)可以增加有T790M突变的肺癌细胞对阿法替尼的敏感性。但肺癌细胞对奥希替尼继发性耐药后的代谢特点尚无相关研究,2-DG是否在奥希替尼耐药逆转中仍能发挥作用以及其具体机制仍需得到阐明和验证。本研究将对上述问题进行深入探讨,以求为克服奥希替尼耐药提供新的方法依据。目的:探讨肺癌细胞对奥希替尼继发性耐药后的代谢特点,明确2-DG逆转奥希替尼继发性耐药的作用及可能的机制。方法:通过体外诱导法建立奥希替尼继发性耐药肺癌细胞株H1975-OR;用MTT法、克隆形成实验、Ki67蛋白荧光染色、乳酸代谢测定评估细胞株对奥希替尼的耐药性及耐药后的代谢特点;通过Western blot、流式细胞凋亡检测、乳酸代谢测定、小干扰RNA转染检测2-DG逆转奥希替尼继发性耐药的作用及可能的机制。结果:1.对比奥希替尼继发性耐药肺癌细胞株(H1975-OR)和奥希替尼敏感肺癌细胞株(H1975),细胞株H1975-OR糖酵解水平明显升高、奥希替尼抑制其糖酵解的能力明显减弱。2.2-DG可以显著抑制细胞株H1975-OR的糖酵解水平,进而逆转其对奥希替尼耐药。3.奥希替尼联用2-DG后诱导细胞株H1975-OR凋亡的能力增加,H1975-OR的促凋亡蛋白BIM表达上调、抗凋亡蛋白BCL-2表达下降;干扰BIM表达后,2-DG逆转H1975-OR对奥希替尼耐药的作用减弱。结论:2-DG可以逆转NSCLC细胞对奥希替尼继发性耐药,其机制可能与抑制细胞糖酵解进而激活BIM/BCL-2信号通路诱导凋亡增加有关。