论文部分内容阅读
胆道闭锁(Biliary atresia,BA)是新生儿胆汁郁积最常见的原因,病因尚不明确,预后差。其病理改变是探讨BA发病机制和临床转归的关键,肝门的病变可能是整个病变的起点。本研究拟通过胆道闭锁患儿肝门纤维块和肝脏组织的病理和超微结构观察,结合免疫组化染色,分析其与胆道闭锁病人临床转归的相关性,旨在进一步探讨胆道闭锁的发病机制和指导临床治疗。
第一部分胆道闭锁肝内外胆系组织学病理形态分析
目的:
对早期BA肝组织及肝门纤维块进行病理形态观察;应用电子显微镜分析BA肝组织内细胞器的特征,并对肝门成纤维细胞形态进行分化程度评分,进而与肝组织纤维化进行相关分析。旨在进一步对胆道闭锁肝内外胆系组织学病理形态进行深入研究。
方法:
收集2005年7月~2006年5月复旦大学附属儿科医院21例胆道闭锁Kasai根治术病例,平均手术年龄66±20天,术中取肝门纤维块及肝脏组织标本。对照组为5例胆汁淤积和10例胆总管囊肿,留取肝脏组织标本。在光镜和电镜下观察标本的病理改变。肝组织学纤维化分级采用三级分级法。透射电镜为Phillip CM-120,超微结构变化内容包括肝细胞、毛细胆管、肝门成纤维细胞、细胞器结构改变。肝门成纤维细胞活跃程度分级:(1)成纤维细胞幼稚型:大于50%成纤维细胞幼稚(2)成纤维细胞老化型:大于50%成纤维细胞衰老(3)中等:介于上述情况之间。采用SPSS14.0 软件,半定量比较胆道闭锁与对照组肝脏纤维化的差异,检验胆道闭锁肝门纤维块成纤维细胞活跃程度与肝纤维化分级相关性。
结果:
1,早期BA肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及纤维化形成,三级评分系统分析BA肝纤维化程度明显高于同年龄胆汁淤积和胆总管囊肿患儿。
2,BA肝门病理表现为毛细胆管增生,部分管腔闭锁,部分狭窄,管腔内炎细胞浸润及部分淤胆,大量间质成分增生。
3,BA 电镜下组织学特征是肝门成纤维细胞活跃、肝脏毛细胆管上皮微绒毛缺失、肝细胞及肝血窦内电子致密物质增多及毛细胆管扩张。
4,BA肝门纤维块的成纤维细胞分化程度与肝组织纤维化程度相关(P=0.04)。
结论:
BA肝组织病理改变主要是肝内门脉区胆管炎症及纤维化形成,其纤维化程度明显高于同年龄胆汁淤积和胆总管囊肿患儿;BA超微结构改变主要体现在肝门组织成纤维细胞活跃、毛细胆管上皮微绒毛缺失、肝细胞及肝血窦内电子致密物质增多等,肝门纤维块的成纤维细胞分化程度与肝纤维化程度相关。
第二部分胆道闭锁肝内外胆系免疫组化研究与临床预后相关性分析
目的:
测定BA肝组织和肝门纤维块CD68、MCP-1和ICAM含量,了解其在发病过程的重要性和相关性。检测α—SMA,体现BA肝组织和肝外胆系的病变程度。肝内外组织免疫炎性改变与临床预后相关分析,旨在寻找提示预后指标。
方法:
病例收集同第一部分。采用鼠兔二步法免疫组化染色方法对胆道闭锁和对照组肝组织、肝门纤维块进行CD68、MCP-1、ICAM 和SMA 染色。选用LEICA DM研究级生物显微镜,QWIN 软件环境下测量抗体阳性细胞面积百分比和平均光密度。随访19例BA患儿术后3月直接胆红素下降比率,分别与肝组织CD68、MCP-1、ICAM和α—SMA表达量进行相关性分析。数据分析采用SPSS14.0软件,分析胆道闭锁肝门纤维块与肝脏组织CD68、CD54、ICAM、α—SMA的相关性;比较胆道闭锁与对照组上述指标的差异性,进行T检验、方差分析。
结果:
1,CD68表达在汇管区巨嗜细胞及Kupffer细胞胞浆内,BA肝组织内表达较对照组更强,但肝门纤维块表达不常见;MCP-1表达在BA肝脏胆管上皮细胞、血管内皮细胞及肝细胞,肝门纤维块鲜有表达,对照组仅有轻度表达;ICAM在BA肝组织表达更强,主要分布在增生的胆小管、小叶间胆管,以及汇管区附近的肝细胞胞浆内;α—SMA在BA纤维块高度表达于胆管上皮、胆管周围的胶原纤维。
2,CD68、MCP-1、ICAM、α—SMA阳性表达量和表达强度明显高于对照组,其中ICAM最为显著。除了MCP-1外,CD68、ICAM、α—SMA在肝脏表达的表达量与表达强度呈线性正相关,相关系数分别是r=0.838,P=0.0002(CD68);r=0.565,P=0.035(ICAM):r=0.549,P=0.022(α—SMA)。BA肝脏α—SMA 表达量与肝脏纤维化程度正相关(P=0.02)。
3,BA 肝脏CD68和α—SMA阳性表达面积百分比与术后3月直接胆红素下降率呈负相关,r=-0.645,P=0.023(CD68):r=-0.653,p=0.029(α—SMA)。
结论:
BA肝脏内CD68、MCP-1、ICAM和SMA阳性表达量及强度均明显高于对照组,提示BA肝组织内抗原呈递细胞活跃,免疫介导炎性反应引起进行性胆管破坏。CD68表达量与术后3个月直接胆红素下降比率呈负相关,提示抗原呈递细胞活跃范围和程度影响临床预后。SMA的阳性表达量与术后3个月胆红素消退呈显著负相关,预示肝内外胆管系统纤维化,乃至肝硬化。