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疏水电荷诱导色谱(HCIC),根据疏水相互作用在中性pH值下吸附蛋白,在温和pH值条件下通过静电排斥作用洗脱蛋白。HCIC无需对原料进行预处理,即无需调整pH值,离子强度等,因此降低了生物分离纯化的成本。本文以用于抗体纯化为目标,结合疏水电荷诱导色谱和抗体分离的特点,合成了新型疏水电荷诱导色谱介质。本文主要描述了HCIC色谱介质的活化,配基的筛选与合成及吸附蛋白的研究,其主要内容包括以下几个方面:
1.以琼脂糖凝胶Sepharose CL-6B为基质合成了HCIC介质,以烯丙基溴活化法活化介质,活化的反应条件为:30%AB,4 mol/L NaOH和一定量的DMSO,反应时间为24 h,反应温度为25℃,反应转速为170 rpm。在此条件下,活化密度可达200-220μmol/ml。
2.合成了新型疏水电荷诱导色谱介质。将配基SLC-AN偶联至介质Sepharose CL-6B。在50℃下进行配基的偶联反应,调整配基的用量,获得了配基修饰密度分别为94、71和39μmol/ml的色谱介质。
3.对不同条件下制备介质对γ球蛋白和BSA的静态吸附容量进行了研究。γ球蛋白主要通过疏水作用与配基结合,具有耐盐特性;而BSA主要通过静电作用与配基结合,在高盐条件下吸附量很低。γ球蛋白和BSA在pH8.0条件下达到最大吸附容量,吸附容量均随pH降低而减少,因此可以通过降低pH来达到蛋白的解吸。
4.使用等温滴定微量热仪(ITC)研究蛋白质与色谱介质间的相互作用力,结果表明,ITC测得的热力学数据为我们提供了一个新的方法来评价蛋白质与介质之间的相互作用力。