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目的：酸性丝氨酸蛋白酶（Acidic Serine Protease from Neanthes japonica, ASPNJ）是本研究课题组从中国日本刺沙蚕内提取的一种对纤维蛋白有较强的溶解作用的蛋白酶，曾命名为沙蚕纤溶酶，现在命名为酸性丝氨酸蛋白酶（ASPNJ）。在前期研究表明ASPNJ对急性髓细胞白血病NB4细胞和慢性髓细胞白血病K562细胞具有明显的诱导凋亡、抑制细胞增殖等作用。本论文主要从该药物对多种白血病细胞的增殖抑制作用研究入手，选择急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞模型，进一步探讨ASPNJ对淋巴细胞白血病抑制作用的可能机制。通过ASPNJ对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞体外的抗肿瘤作用结果，为白血病的研究与治疗提供新的思路和方法，并做出初步的机制研究，为抗白血病研究与治疗开创新的方向。方法：1、MTT比色法检测ASPNJ对八种细胞（K562细胞，RK562细胞，NB4细胞，HL-60细胞，239T细胞，THP-1细胞，U937细胞，Jurkat细胞）的增殖抑制作用，ASPNJ浓度为2μg/ml,4μg/ml,8μg/ml,16μg/ml,32μg/ml；2、瑞氏-吉姆萨染色观察ASPNJ（16μg/ml）作用Jurkat细胞形态学的变化；3、ASPNJ（16μg/ml）作用Jurkat细胞，提取Jurkat细胞膜蛋白进行等电聚焦和SDS-PAGE电泳得到双向电泳图；4、扫描仪对双向凝胶电泳图进行扫描，然后对凝胶图像进行分析，得到两组蛋白的差异点；5、选取明显差异的蛋白质点进行质谱分析，得到相对分子量，等电点等基本信息；6、用Western Blot和RT-PCR对差异明显的蛋白质进行验证；结果：1、 MTT结果可以看出随着ASPNJ浓度越大对细胞的增殖抑制率越高，而且对Jurkat细胞抑制率比较明显；2、瑞氏-吉姆萨染色结果：药物作用后细胞形态发生了变化，细胞膜破裂染色质浓缩和核固缩等明显的细胞凋亡形态学变化；3、 Jurkat细胞膜蛋白的双向电泳凝胶图片得到比较多的蛋白点，经Image-master2D Platinum7.0软件分析得到对照组与实验组的重复率较高；质谱分析及数据库比对结果得到差异蛋白点具体的信息，其中明显差异蛋白质点中14-3-3theta，Ranbp-1和Btf3三种蛋白在Jurkat细胞实验组表达均减少。Western Blot结果表明这三种蛋白在对照组和实验组中的表达量变化和双向凝胶电泳图的分析结果趋于一致；RT-PCR结果显示该三种蛋白在mRNA水平的差异变化并不明显。结论：ASPNJ对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖抑制非常明显，ASPNJ可促进Jurkat细胞凋亡和坏死，ASPNJ对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖抑制，诱导细胞凋亡的作用可能与包含Ranbp-1蛋白，14-3-3theta蛋白和Btf3蛋白表达减少的机制相关。