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猪细小病毒病是因感染猪细小病毒(Porcine parvovirus, PPV)所致,是导致猪SMEDI综合症(S: stillbirth, M: mummification, ED: embryonic death I: infefitility)的主要疾病之一。PPV主要引起猪繁殖障碍,还可致皮炎和腹泻,与2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2, PCV 2)协同感染是导致断奶仔猪多系统衰竭综合症(porcine postweaing mulisystemic wasting syndome, PMWS)的主要原因之一。PPV呈世界性分布,给全球养猪业造成经济损失是巨大的、持续的。接种PPV灭活疫苗是控制PPV感染的有效的措施。灭活苗免疫的猪,多呈全病毒抗体阳性,用现行的血清学诊断方法不能将其与PPV感染猪区分开来,因此,建立一个敏感性高、特异性强、简单快速、易于操作、经济适用,能区分PPV灭活疫苗免疫猪与野毒感染猪的诊断方法有重要的经济和社会意义。 PPV非结构蛋白(NS)对病毒DNA复制、RNA转录及病毒的组装均具有重要作用。PPV持续感染的猪会产生抗NS1蛋白的循环抗体,而接种灭活疫苗或亚单位疫苗免疫的猪却不产生抗NS1蛋白的循环抗体。建立携带PPV非结构蛋白反义RNA的细胞系,细胞系中反义RNA可以抑制PPV复制。 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是通过一段双链RNA(dsRNA)导致同源mRNA特异性降解从而使目的基因失去表达的技术。在医学研究中,RNAi可能成为基因治疗的新秀,广泛用于抗病毒、抗肿瘤等疾病治疗。 PPV结构蛋白VP2是主要免疫原性抗原,是抗原决定簇的载体,在昆虫细胞中可高效表达,产物自行装配成病毒样粒子(VLPs)。重组PPV病毒样粒子(PPV∶VLPs)可以用作抗猪细小病毒的有效重组疫苗。PPV∶VLPs可使外源多肽在特定部位表达,既而产生大量具有免疫原性的多肽,从而刺激机体产生高水平抗体和辅助T细胞反应(HTC)及细胞毒性T细胞反应(CTL)反应。 鉴于上述研究背景,本研究探讨了PPV NS1蛋白和VP2蛋白在病毒防治中的应用。主要研究内容如下: 1 用纯化的PPV作抗原,建立了PPV-全病毒-ELISA检测方法,并将其作成商品化试剂盒用于临床。用IBRS-2接种细小病毒,经浓缩和纯化提取全病毒作为抗原包被ELISA板,建立了间接ELISA诊断方法(PPV-全病毒-ELISA),用于检测血清抗体。经试验,最佳抗原包被量为300 ng/孔;最佳血清稀释度是1∶80。与细小病毒乳胶凝集(LAT)诊断方法比较显示:无论检测自然感染猪血清还是免疫猪血清,PPV-全病毒-ELISA的检出阳性率都高,尤其是对于免疫猪血清的检测,PPV-