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为了阐明奶牛SCAP/SREBP1在肝脏细胞中调控脂肪酸合成酶基因的转录机制,试验以荷斯坦奶牛肝脏组织c DNA为模板,克隆SCAP基因的编码序列,构建pc DNA3.1-SCAP表达载体;利用PCR从奶牛基因组DNA中克隆构建3个不同片段长度的FASN荧光素酶报告基因载体;采用免疫荧光的方法对SCAP以及SREBP1标记,激光共聚焦观察SCAP及SREBP1蛋白的亚细胞定位;并应用实时荧光定量PCR技术检测SCAP基因m RNA的表达;用Western blotting法检测SCAP和核SREBP1蛋白表达;将FASN基因启动子质粒转染至肝脏细胞,并分别转染pc DNA3.1-SREBP1质粒、pc DNA3.1-SCAP质粒以及共转染pc DNA3.1-SREBP1和pc DNA3.1-SCAP质粒作为处理,双荧光素酶检测FASN启动子的活性影响;后期又将FASN基因启动子质粒和pc DNA3.1-SREBP1质粒转染至肝脏细胞,并分别转染不同剂量的pc DNA3.1-SCAP质粒作为处理,双荧光素酶检测FASN启动子的活性影响;在肝脏细胞中分别转染pc DNA3.1-SREBP1质粒、pc DNA3.1-SCAP质粒以及共转染pc DNA3.1-SREBP1和pc DNA3.1-SCAP质粒作为处理,实时荧光定量PCR技术检测SREBP1/FASN基因的m RNA表达水平;尼罗红染色分析不同处理因素对细胞内脂滴的影响。结果表明:克隆了SCAP基因CDS区3836bp序列,激光共聚焦观察发现SCAP定位于细胞质,SCAP以及SREBP1基因过表达能够增加肝脏细胞中SCAP和SREBP1的蛋白表达。构建了三个FASN基因的启动子载体PGL3-FASN1-3,长度分别为177bp、255bp、399bp,序列分析发现FASN2和FASN3中都含有SRE结合位点;双荧光素酶检测发现随着FASN基因片段长度的增加,其启动子活性也逐渐增加,与转染pc DNA3.1空载体的对照组相比,SREBP1处理组的细胞FASN启动子活性显著升高,而SCAP和SREBP1共同处理组细胞FASN启动子活性也显著增加;在共转染SCAP和SREBP1质粒后,SCAP可以剂量依赖性的增加PGL3-FASN启动子的活性;SCAP/SREBP1过表达能够增加肝脏细胞中FASN基因m RNA的表达,同时能显著增加细胞内脂滴的含量。本研究表明,SCAP/SREBP通路能够通过促进FASN基因的转录表达,增加肝脏细胞中脂滴的合成。