兴凯湖翘嘴鲌(Culter alburnus)H-FABP与LPL基因的克隆及表达

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:saintjob
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翘嘴鲌(Culter alburnus)是中国名贵的鲤科(Cyprinidae)淡水鱼类,具有很高的经济价值。但由于过度捕捞,导致天然资源日益减少,其市场需求日趋紧张,因此,翘嘴鲌具有良好人工养殖前景。鱼类的肉质风味、口感等是影响其受消费者欢迎程度的重要因素。目前,从分子水平对鱼类肉质进行的研究越来越多,许多鱼类肉质性状候选基因被逐渐发掘出来,其中脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase,LPL)和脂肪酸结合蛋白家族(fattyacidbindingproteins,FABPs)已被广泛研究。本研究根据Genbank中已知的鲤科鱼类LPL和H-FABP基因序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术克隆出翘嘴鲌脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase,LPL)和心型脂肪酸结合蛋白(Heart FABP)的部分cDNA序列,再利用获得的序列设计引物扩增出其他部分的cDNA序列,将所得序列进行拼接,得到全序列;采用荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测了两者在兴凯湖翘嘴鲌心脏、肝脏、脾、中肾、脂肪、肌肉、性腺及鳃等组织中的表达量。试验结果如下:1.获得了翘嘴鲌H-FABP基因部分CDS区,并采用RACE技术克隆得到该基因的3’端和5’端未知区域,序列拼接后得到778bp的cDNA序列,其中包括编码133个氨基酸和一个终止密码子的完全CDS区序列(402bp),完整的3’UTR(242bp)区和5’UTR区(134bp)。2.通过Blast比对显示翘嘴鲌H-FABP基因CDS区与鲤鱼(Cyprinus carpio)、齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)的同源性达91%;H-FABP基因氨基酸同源性比对显示与虹鳟的同源性为76%;与斑马鱼的同源性为85%,翘嘴鲌比斑马鱼在462位多两个氨基酸,分别为谷氨酰胺(Q)和半胱氨酸(C)。3.得到翘嘴鲌LPL基因的一部分CDS区,使用普通PCR分段克隆剩余序列并采用RACE法获得该基因的5’端和3’端未知区域,进行序列拼接,获得由编码502个氨基酸和一个起始密码子的完全CDS区序列(1524bp)以及5’UTR(159bp)区和部分的3’UTR区(423bp)组成的共1947bp的基因组序列,Genbank登录号为KC166231。4.核苷酸同源性比对显示翘嘴鲌LPL基因CDS区与草鱼(Ctenopharyngodon)的CDS区核苷酸同源性达到98%;草鱼(Ctenopharyngodon),鲢(Hypophthalmichthys molitrix),鳙(Aristichthys nobilis)的同源性达到97%以上;与鲤(Cyprinus carpio),斑马鱼(Danio rerio),鲫(Carassius auratus)等鲤科鱼类的同源性为90%。5.对翘嘴鲌7个组织(鳃、心脏、肠、肝脏、肌肉、肾脏、脾脏)进行H-FABP和LPL基因表达分析。Real-time PCR结果表明,翘嘴鲌H-FABP基因mRNA在肝脏中表达量最高,且与其他组织表达量差异显著(p<0.05),在心脏、肌肉、肠、脾组织中的表达量次之,再次是肾脏、鳃组织中的表达量。LPL基因mRNA在心脏当中表达水平最高,脾和肝脏中的表达量次之,其他组织中表达量较低,但差异不显著(p>0.05)。
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