目的 研究结肠癌组织KRAS2基因所在区域染色体12p12-13杂合性缺失,以了解该区域因染色体不稳定而发生的DNA片段丢失情况,探索野生型KRAS2基因在结肠癌发生发展过程中可能发生的遗传学改变。进一步观察野生型KRAS2基因对人结肠癌细胞株Caco-2的生长影响作用,以深入探讨这一原癌基因的抑癌作用和机制。 方法 1) 从10例结肠癌手术切除标本中,提取肿瘤、癌旁及相应正常组织的DNA,用荧光标记多重微卫星PCR-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对染色体12p12-13杂合性缺失进行分析。 2) 野生型KRAS2基因的克隆及含KRAS2基因真核表达载体pCI-neo的构建。 3) 将野生型KRAS2基因转染结肠癌细胞株Caco-2并筛选稳定表达的克隆。 4) 采用四甲基偶氮唑(MTT)法观察细胞的生长情况,用流式细胞仪观察细胞周期的情况,用Western Blot检测Caco-2细胞表达野生型KRAS2蛋白情况。 结果 1) 10例癌旁组织中有3例(30%)在12p12-13处至少有一个微卫星位点出现杂合性缺失,其中D12S1034出现频率最高,为28.57%(2/7);10例原发性结肠癌标本中6例(60%)在12p12-13处至少有一个微卫星位点出现杂合性缺失,D12S1034、D12S1591是高频率缺失集中的区域,均占42.88%(3/7);癌旁组织、癌组织均发生杂合性缺失的标本有3例,占30%(3/10);仅在癌组织中发生杂合性缺失的标本有3例,占30%(3/10);仅在癌旁组织中发生杂合性缺失,癌组织无信号的标本1例。