论文部分内容阅读
目的: 检测永生化非癌性人鼻咽上皮细胞NP-69(NP-69)及鼻咽癌细胞株5-8F (5-8F)细胞中FHL2蛋白质水平,以探讨FHL2基因对人鼻咽癌5-8F细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能的作用机制。 方法: 1、用Western blot法检测NP-69和5-8F细胞中FHL2表达情况,分析FHL2与鼻咽恶性肿瘤相关联情况。 2、利用脂质法将FHL2干扰序列转入5-8F细胞株,荧光显微镜下观察转染效率,并采用定量real-time PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测转染后5-8F各组细胞中FHL2的mRNA与蛋白质水平,建立干扰效果稳定的5-8F细胞系。 3、利用CCK-8法、细胞平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell实验分别检测转染后5-8F各组细胞增殖、迁移及侵袭能力。 4、利用定量real-time PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测转染后5-8F各组细胞中c-myc,β-catenin的mRNA与蛋白质水平,探讨FHL2影响人鼻咽癌5-8F细胞恶性生物学行为的可能机制。 结果: 1、Western blot实验结果显示鼻咽癌细胞株5-8F的FHL2蛋白质水平高于NP-69(P<0.01)。 2、倒置荧光显微镜下观察转染效率,结果显示转染siRNA 24h后5-8F细胞转染效率约为80%,且转染siRNA的5-8F细胞中FHL2表达水平显著低于无关序列组和空白对照组(P<0.01)。 3、CCK-8实验结果表明,敲低FHL2基因后,5-8F细胞增殖能力明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),然而NC组和空白对照组相比无明显差异(P>0.05)。 4、集落形成实验结果显示下调FHL2表达后可以削弱5-8F细胞的集落形成能力。 5、划痕实验结果显示,与NC组和Control组相比,si-FHL2组的5-8F细胞迁移速度明显下降(P<0.01)。 6、细胞体外侵袭实验结果显示与NC组和Control组相比,si-FHL2组的5-8F细胞穿模细胞数明显减少(P<0.01)。 7、定量real-time PCR(qRT-PCR)及Western blot实验结果显示转染组5-8F细胞中c-myc,β-catenin的mRNA及相应蛋白质水平均有不同水平下降(P<0.01)。 结论: 1. Western blot实验结果显示5-8F细胞中FHL2蛋白质水平高于NP-69 (P<0.01),提示FHL2在鼻咽癌的发生发展过程中发挥了一定作用。 2. CCK-8实验、集落形成实验、划痕实验及细胞体外侵袭实验显示敲低FHL2基因后可以抑制5-8F细胞增殖、侵袭及迁移能力(P<0.01)。 3.定量real-time PCR(qRT-PCR)及Western blot实验结果显示转染组5-8F细胞中c-myc,β-catenin的mRNA及相应蛋白质水平均有下降(P<0.01)。提示FHL2可能通过Wnt信号通路影响鼻咽癌5-8F细胞的恶性生物学行为。