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目的：1.观察培养的人肾小球系膜细胞(human mesangial cells, HMCs)的形态学,掌握细胞培养的基本操作过程。2.观察霉酚酸(MPA)、甲强龙(MP)及二者联合对人肾小球系膜细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,阐明药物剂量、作用时间与效应之间的关系。方法：37℃恒温水浴箱中复苏冻存的系膜细胞,并将细胞移入50 ml培养瓶中置于37℃、5%CO2培养箱中培养。当HMCs生长至80%贴壁时,传代并继续培养,传至3--4代后,细胞活力较强,用于实验。系膜细胞接种于培养板中,第一步实验：用MTT法在490nm波长处检测不同浓度的霉酚酸(0μmol·L-1、0.1μmol·L-1、0.5μmol·L-1、1μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1)及甲强龙(0 mg·L-1、1 mg·L-1、10 mg·L-1)分别作用24h、48h、72h后的吸光度值,观察药物对系膜细胞增殖抑制作用,然后对增殖抑制明显组(MPA 1μmol·L-1及MP 1mg·L-1)联合作用48 h后检测其对系膜细胞增殖抑制程度；第二步实验：霉酚酸(Oμmol·L-1、1μmol·L-1、2.5μmol·L-1、5μmol·L-1、10μmol·L-1)及甲强龙(5 mg·L-1)分别作用48h后,流式细胞仪检测其对系膜细胞周期G0／G1(DNA合成前期)与S (DNA合成期)的影响,然后将MPA 2.5μmol·L-1组及MP 5 mg·L-1组联合作用并检测其细胞周期的变化；第三步实验：霉酚酸(0 Wnol·L-1、1μmol·L-1、2.5μmol·L-1、5μmol·L-1、10 Wnol·L-1)及甲强龙(0 mg·L-1、1 mg·L-1、10 mg·L-1)分别作用48h后,流式细胞仪检测其对系膜细胞凋亡的影响。结果：1.霉酚酸、甲强龙及二者联合作用时呈浓度依赖性抑制系膜细胞的增殖；霉酚酸浓度≥1μmol·L-1时,抑制作用趋于稳定；霉酚酸及甲强龙作用48h后抑制作用最强；霉酚酸及甲强龙联合作用后,其细胞增殖抑制率较单种药物明显增高,且差异具有统计学意义(p＜0.05)。2.霉酚酸可将系膜细胞周期阻滞于S期；甲强龙可将系膜细胞周期阻滞于G。／G1期；二者联合时对G0／G1期及S期均有阻滞作用,与对照组比较差异具有统计学意义(p<0.05)。3.霉酚酸可促进系膜细胞凋亡,而小剂量甲强龙(≤10 mg·L-1)对系膜细胞凋亡没有影响。结论：1.霉酚酸和甲强龙对体外培养的人肾小球系膜细胞有明显地抑制增殖现象,两药联合应用的抗增殖效果优于两药单独应用。2.霉酚酸及甲强龙抑制系膜细胞增殖,可能与其促进细胞凋亡以及有序地阻滞细胞周期有关。3.本课题从抑制细胞周期角度,研究霉酚酸酯及甲强龙对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖的影响,特别是为细胞周期序贯联合治疗提供了理论依据。