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目的通过与基因测序法进行比较来评估变性高效液相色谱(denaturing high- performance liquid chromatography,DHPLC)对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamase,ESBLs)进行基因分型的准确性,并运用DHPLC方法检测CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型,从而了解中南大学三所附属医院的CTX-M型ESBLs基因型分布情况。方法从中南大学三所附属医院收集171株多重耐药肠杆菌科细菌,按临床实验室标准研究所(CLSI 2006)所推荐的方法进行表型确证试验,采用多重PCR对标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株进行blaCTX-M扩增,扩增产物经DHPLC分析后得到标准菌株和临床菌株色谱峰图,通过比对标准菌株色谱峰图对临床菌株进行基因分型。同时选择25株多重PCR扩增阳性的菌株进行特异性PCR扩增,其产物用基因测序法确定基因型。最后通过比对基因测序和DHPLC这两种方法对25株临床菌株的基因分型结果,来评估变性高效液相色谱法对CTX-M型ESBLs进行基因分型的准确性。结果171株多重耐药肠杆菌科细菌经表型确证试验确认有142株临床菌株ESBLs表型阳性。经多重PCR扩增证实,142株肠杆菌中109株携带blaCTX-M基因,52株为CTX-M-1组产物,57株为CTX-M-9组产物,检出率达76.8%(109/142)。其中,大肠埃希菌携带blaCTX-M基因的比例最高,其次是肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌。109株临床菌株的多重PCR产物经DHPLC分析后检出4种不同的blaCTX-M基因型:33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14。25株多重PCR扩增阳性的临床菌株进行特异性PCR扩增,有14株为CTX-M-1组产物,11株为CTX-M-9组产物。经过基因测序后显示四种基因型:blaCTX-M-15、btaCTX-M-3、blaCTX-M-14及blaCTX-M-82。25株临床菌株的基因测序结果与DHPLC基因分型结果作比较发现,24株DHPLC的基因分型结果与基因测序结果完全吻合,但是有1株DHPLC基因分型结果为CTX-M-15而基因测序结果为CTX-M-82。结论(1)DHPLC利用特殊的DNA色谱柱在部分变性温度条件下操作,可以通过比对标准色谱峰图对待测样本进行基因分型,并且经基因测序法证实运用DHPLC对blaCTX-M基因进行分型具有准确、快速和经济等优点,是快速筛查耐药基因型别的强有力工具。(2)运用变性高效液相色谱对中南大学三所附属医院产CTX-M型ESBLs菌株进行基因分型,共检出4种不同基因型别的CTX-M型ESBLs,即CTX-M-3型、CTX-M-15型、CTX-M-9型和CTX-M-14型。其中,CTX-M-14型为CTX-M型ESBLs的主要型别。(3)中南大学三所附属医院多种细菌携带CTX-M型ESBLs,以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌最多见。