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miRNA是指序列长度在22bp左右的,非蛋白编码的小分子RNA,它通过与靶基因序列完全或部分互补配,来降解或抑制基因的表达,从而参与生命过程的调控。小鼠胚胎干细胞中沉默Dicer引发的不良反应表明miRNA在生命发育过程中占据重要角色。miR-148a在肝脏中特异性高表达,但其所发挥的功能作用至今仍然不是很明了。 本试验一方面通过荧光定量PCR的方法检测了金华猪肝脏生长发育过程中miR-148a及let-7i的表达变化,并对二者在金华猪和大约克猪各组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、胰、皮脂)中的表达分布做了详细的研究;另一方面利用生物信息学对miR-148a的功能进行了初步的分析预测,并选取了十个可能的靶基因进行细胞水平上的验证研究,从而更深层次的探讨miR-148a在肝脏中所发挥的功能作用。 miR-148a在金华猪肝脏生长过程中的表达呈现一定的规律性,即其表达量在胚胎期最高,并随着出生后日龄的增加逐渐降低;miR-148a在猪的肝脏中特异性高表达(P<0.05);通过进一步比较胚胎80天和出生后90日龄的金华猪的各组织中miR-148a的表达量发现,所检测的八个组织在胚胎期80天的miR-148a表达量均不同程度高于出生后90日龄(P<0.05);通过对胚胎80天和出生后90日龄的金华猪和大约克的各组织中的miR-148a表达量进行比较,发现在胚胎80天时金华猪中的大部分器官(肝、脾、肺、小肠、皮脂)中的miR-148a的表达量显著高于大约克(P<0.05),而出生后90日龄八个组织中的表达量却低于大约克,且除脂肪外,其余均差异显著(P<0.05)。 生物信息学综合分析表明,miR-148a参与肝脏的生长发育调控过程,尤其是在细胞增殖分化方面。在小鼠胚胎肝细胞中过表达miR-148a可以显著降低Cebpa的表达量(P<0.05)。通过进一步检测Cebpa在金华猪肝脏生长过程中的变化得知,Cebpa的表达趋势与miR-148a的呈负相关。我们推测Cebpa可能是miR-148a的靶基因,在肝脏中miR-148a可能通过靶向Cebpa来调控细胞增殖和分化效应之间的平衡。 本试验不仅为研究miR-148a在猪肝脏的正常生长发育过程中所扮演的角色提供了理论基础和方法思路,而且为揭示正常生命过程中一些生理调控机制提供了新的线索,也癌症等临床疾病的治疗研究提供了参考依据。