产PDG杜仲内生菌的分离、筛选及优化培养

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杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.),单科、单属、单种,是我国特有的经济树种。杜仲作为国家二类保护植物,在现有资源被充分利用的基础上,也需要得到应有的保护。本论文从内生真菌的角度出发,希望在既不破坏现有的杜仲资源的基础上,还能开发出有益于医药事业的天然活性物质,对杜仲进行了内生菌的分离、鉴定,产松脂醇二葡萄糖苷菌株的筛选以及相关培养基的优化,结果如下:第一,对7年以上杜仲皮中的内生菌进行分离,得到122株内生菌;其中75株真菌,47株细菌;经摇瓶培养后分析各菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的能力,结果发现有8株菌能产生PDG,8株均为真菌;最高产量可达13.387mg/L。经初步鉴定,这8株菌分属于5属,即茎点菌属(Phloma.)、腐霉属(Pythium)、卵形孢霉属(Oospora)、球黑粉霉属(Tolyposporium)、砖红镰孢霉属(Lateritium)。第二,对已经筛选出的产PDG的8株菌进行了初步研究,获得了高产PDG的菌株,并对其培养基进行了优化,明确了该菌株的生长条件和PDG产生的优化培养基。第三,采用Plackett-Burman设计(Plackett-Burman Design,PB)法,对影响供试菌株产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的14个因素进行了筛选。结果表明:影响该菌发酵产生松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的主要培养基成分为麦芽糖、可溶性淀粉、NH4Cl、NaNO3、FeSO4、KH2PO4。在此基础上,再采用响应曲面法(Response Surface Methodology,RSM)对其6个显著因子的最佳水平范围进行研究。通过对二次多项回归方程求解得知,在上述自变量分别为麦芽糖、可溶性淀粉、NH4Cl、NaNO3、FeSO4、KH2PO4时,松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的产量从13.387mg/L提高到了29.386mg/L。
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