植物致病细菌黄单胞菌通过III型分泌系统将TALE转录因子蛋白转运到植物细胞膜内，TALE蛋白进入植物细胞后通过模仿真核细胞中的转录因子对细胞进行重新编程。TALE蛋白中的重复单元与DNA碱基间拥有简单对应关系，这种对应关系一方面使研究者可以对天然TALE蛋白的DNA结合位点进行预测，另一方面，使得人为改变TALE重复单元，使之识别目的靶位点成为了可能。然而，由于将TALE重复单元按照特定的顺序组装起来具有一定的难度，这一度成为限制TALE人工核酸酶（TALEN）广泛应用的瓶颈。而且，TALE蛋白用于识别一个DNA碱基的氨基酸数量比ZFN要多4倍，因此，在不影响TALEN的活性前提下，给TALE蛋白去掉一些不必要的部分对更广泛的应用TALEN具有重要意义。另外，SunnyTALEN骨架在酵母基因组修饰中比野生型骨架的工作效率高7倍，在人基因组修饰中比野生型高出大于2.5倍，这种TALEN骨架比其他骨架的作用效率更高。基于以上背景，本研究进行的实验如下：1. PCR扩增重复单元单体，通过Golden Gate克隆方法，应用酶切-连接反应组装TALE重复单元四聚体，构建了含256个质粒的重复单元四聚体库。2.基于重复单元四聚体库，结合PCR突变和Golden Gate克隆，创建一种构建TALEN表达载体的新方法，构建了编码靶向小鼠Rosa26基因TALEN的表达载体。3.在酵母和人293T细胞中检测具有不同长度N端TALEN在报告载体上的工作效率，并应用一种新的多位点突变方法构建了SunnyTALEN骨架载体。本研究证明了基于重复单元四聚体库快速、简便、高效构建TALEN表达载体新方法的可行性和实用性；在酵母和人293T细胞中对N端长度进行了优化；完成了SunnyTALEN骨架的构建。