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目的探索常用糖皮质激素药物诱发小鼠药源性证候的标准化造模方法及其评价指标,并评估补肾健脾治法相关方药对药源性证候的初步疗效。方法实验一:选用ICR、BALB/c、C57BL/6J、KM和裸小鼠5种品系小鼠为实验对象,采用泼尼松龙进行干预。每种小鼠16只,其中正常对照组8只,泼尼松龙组8只。以0.5 mg/kg/d泼尼松龙连续灌胃14天。实验二:分别采用不同剂量氢化可的松(0.33、0.66、3.3、12.5 mg/kg/d)、泼尼松龙(0.25、0.5、2.5、12.5 mg/kg/d)、地塞米松(0.0125、0.05、0.25、1.25mg/kg/d)灌胃ICR小鼠,每组16只,并设置正常对照组,每组半数小鼠给药7天,每组半数小鼠给药14天。实验三:采用1.65 mg/kg/d氢化可的松诱发标准化的药源性脾肾虚证ICR小鼠模型,分别给予四君子汤、六味地黄汤、桂附地黄汤三个中药复方以及助阳散寒(附子肉桂)、滋阴泻火(知母黄柏)、补气生津(人参黄芪)、补血益精(熟地山萸)4种中药药对同步灌胃治疗14天。实验过程中每日观测小鼠体重,运用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠中医四诊信息。实验结束处死小鼠,取脾脏、胸腺称重并计算脏器指数;运用ELISA检测血清皮质酮和ACTH含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达;运用Western blot方法检测肾上腺LDLR、SRBI、St AR蛋白表达。结果实验一:与各自对照组比较,1)泼尼松龙给药后第7天起ICR小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天起BALB/c小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第5天起C57BL/6J小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天裸鼠体重显著下降(P<0.05)。2)泼尼松龙导致ICR小鼠抓力显著下降以及躯干平均温度显著降低(P<0.05)。3)泼尼松龙导致ICR小鼠和裸鼠脾脏质量显著下降以及裸鼠脾脏指数下降(P<0.01),泼尼松龙导致ICR、C57BL/6J和KM小鼠胸腺质量和胸腺指数均显著下降(P<0.01)。4)泼尼松龙显著导致BALB/c与KM小鼠血清皮质酮显著下降(P<0.05),也显著引起Balb/c小鼠血清促肾上腺皮质激素含量显著下降(P<0.01)。5)泼尼松龙显著下调ICR小鼠肾上腺Cyp21a1基因表达(P<0.05),下调C57BL/6J小鼠Star基因表达(P<0.01),下调KM小鼠Cyp11a1、Cyp21a1基因表达(P<0.01),下调裸鼠Star与Cyp21a1基因表达(P<0.05);且泼尼松龙抑制ICR小鼠肾上腺LDLR蛋白表达以及KM小鼠肾上腺St AR蛋白表达。实验二:7天和14天后与正常对组比较:1)3.3mg/kg/d以上剂量氢化可的松、2.5mg/kg/d以上的泼尼松龙、0.25mg/kg/d以上的地塞米松给药14天后内显著抑制小鼠体质量增长(P<0.05或P<0.01)。2)3.3mg/kg/d以上剂量氢化可的松、2.5mg/kg/d以上的泼尼松龙、0.25mg/kg/d以上的地塞米松导致小鼠脾脏萎缩显著(P<0.05或P<0.01);0.66mg/kg/d以上剂量氢化可的松、0.25mg/kg/d以上的泼尼松龙、0.25mg/kg/d以上的地塞米松导致小鼠胸腺萎缩显著(P<0.05或P<0.01)。3)从小鼠四诊指标来看,各剂量氢化可的松和地塞米松均造成小鼠躯体体表温度下降(P<0.05或P<0.01);泼尼松龙对小鼠小鼠躯体体表温度影响较小。4)3.3mg/kg/d以上氢化可的松、0.25mg/kg/d以上泼尼松龙显著抑制皮质酮与促肾上腺皮质激素分泌(P<0.05或P<0.01),0.0125mg/kg/d以上地塞米松显著抑制皮质酮分泌(P<0.01)。5)0.66mg/kg/d以上氢化可的松、0.25mg/kg/d以上泼尼松龙、0.0125mg/kg/d以上地塞米松显著抑制肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)表达(P<0.05或P<0.01),并抑制肾上腺胆固醇转化为激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、St AR)表达。实验三:1)中药复方和中药药对对氢化可的松造成的小鼠体质量下降效果不显著。2)与氢化可的松组相比,附子肉桂组小鼠抓力显著上升(P<0.05);桂附地黄汤组小鼠腋温出现显著升高(P<0.01)。3)与氢化可的松组相比,四君子汤组、六味地黄汤组、桂附地黄汤组、知母黄柏药促进血清皮质酮均显著上升(P<0.05或P<0.01),对于肾上腺类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2)表达下降以及肾上腺胆固醇转化为激素过程中相关蛋白(LDLR、SRBI、St AR)表达下降均有一定缓解作用。结论实验一:开展糖皮质激素药源性虚证研究建议首选ICR小鼠。实验二:糖皮质激素药物造成的小鼠药源性虚证兼有阴虚、阳虚和气虚(泼尼松龙造模后未出现阳虚见证),其脏腑定位主要在肾藏象、脾藏象。采用氢化可的松诱发药源性虚证模型建议给药剂量0.66至3.3mg/kg/d用药14天;采用泼尼松龙诱发药源性虚证模型建议给药剂量2.5mg/kg/d左右用药7天;采用地塞米松诱发药源性虚证模型建议给药剂量0.25mg/kg/d左右用药7天。糖皮质激素药源性虚证的物质基础以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制、以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主。小鼠体重、脾脏、胸腺及体表红外温度,以及类固醇激素合成过程重要酶(St AR、CYP11A1、CYP21A1、CYP11B1)及胆固醇受体(SRBI与LDLR)可作为糖皮质激素药源性证候评价的参考指标。实验三:知母黄柏药对、四君子汤、六味地黄汤、桂附地黄汤对氢化可的松诱发的肾上腺皮质功能抑制均有缓解作用。