老年性黄斑变性（AMD）是一种视网膜老化的退行性疾病,是老龄人群视力缺失的主要原因之一,主要表现为视网膜色素上皮细胞（The retinal pigment epithelium cells）对视细胞外节盘膜吞噬消化能力下降,形成玻璃膜疣,进而引发一系列的继发性病理改变。环状RNA是一种特殊的非编码RNA分子,它通过反向剪接呈封闭环状,与线性RNA相比更加不易被RNA外切酶影响,更加稳定。目前,环状RNA通过mi RNA海绵在组织衰老和年龄相关性疾病中起重要作用。有研究表明,circPVT1在纤维母细胞中通过吸附micro RNA Let-7,调控目标m RNA翻译,从而影响细胞衰老。在本研究中,我们使用过氧化氢（H2O2）建立人视网膜色素上皮细胞（APRE-19）衰老模型,发现该模型中circPVT1表达增加,进而通过分子生物学方法研究circPVT1对视网膜色素上皮细胞衰老的作用。目的:构建H2O2诱导APRE-19细胞衰老模型,明确circPVT1与细胞周期、衰老相关分泌表型蛋白的关系,探讨circPVT1在细胞衰老过程中的作用。方法:用不同浓度H2O2刺激细胞后,建立ARPE-19细胞的衰老模型;通过细胞形态观察,β-半乳糖苷酶染色、CCK-8实验验证细胞衰老;通过流式细胞分析技术检测H2O2刺激衰老后细胞周期的变化;通过q PCR验证circPVT1与ARPE-19细胞衰老的相关性;通过q PCR和Western blot实验检测细胞衰老相关分泌表型因子p21、Lamin B1和MMP3的表达情况;转染si RNA沉默circPVT1后,通过β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞数量、PI染色后流式细胞技术分析细胞周期、q PCR和Western blot实验检测沉默circPVT1后p21、Lamin B1和MMP3的表达。结果:根据不同浓度H2O2刺激细胞2h,通过CCK-8实验检测细胞数量发现H2O2刺激浓度为250μM时为细胞的半致死量,因此采用250μM H2O2的无血清DEME/F12培养基刺激ARPE-19细胞2h建立细胞衰老模型;H2O2刺激组采用250μM H2O2刺激2h,Control组采用单纯无血清培养基处理。实验结果显示H2O2刺激组细胞形态大而扁,并出现空泡样改变;β-半乳糖苷酶染色结果显示H2O2刺激组衰老细胞（蓝色）增多;C CK-8实验结果显示H2O2刺激组细胞生长速率变慢;PI染色结果显示H2O2刺激组细胞产生G2期细胞阻滞;q PCR和Western blot实验表明,与Control组相比,H2O2刺激组circPVT1表达增加的同时,p21、MMP3基因和蛋白表达增多,Lamin B1基因和蛋白表达降低;通过转染si RNA抑制circPVT1的表达。其中,转染si RNA-NC组为NC组;转染si RNA-N C并给予H2O2刺激为NC+H2O2组;转染si RNA-2并给予H2O2刺激为SI+H2O2组。结果显示,与NC组相比,NC+H2O2组中衰老细胞（β-半乳糖苷酶染色）百分比明显增多,SI+H2O2组与NC组相比β-半乳糖苷酶染色细胞百分比也增多,但相比NC+H2O2组染色细胞百分比降低;转染后流式分析结果表明,与NC组相比,NC+H2O2组G2期细胞占比明显增加,发生G2期细胞阻滞。但在沉默circPVT1后,SI+H2O2组与NC+H2O2组相比,G2期细胞阻滞明显缓和;转染后q PCR结果表明,与NC组相比,NC+H2O2组p21、MMP3基因表达增多,Lamin B1基因表达降低。SI+H2O2组与NC+H2O2组相比,p21、MMP3基因表达降低。Western blot实验证明,与NC组相比,NC+H2O2组p21蛋白表达增多,Lamin B1蛋白表达降低。SI+H2O2组与NC+H2O2组相比,p21、MMP3基因和蛋白表达降低,Lamin B1蛋白表达增加。结论:1.采用250μM H2O2刺激可诱导细胞衰老,导致ARPE-19细胞生长速率明显减慢,发生G2期阻滞。2.H2O2刺激ARPE-19细胞衰老后,引起相关衰老分泌表型p21、MMP3、Lamin B1基因和蛋白表达水平的变化。3.H2O2刺激后circPVT1基因表达增加,沉默circPVT1可以改善H2O2引起的细胞衰老及相关衰老分泌表型p21、MMP3、Lamin B1基因和蛋白表达水平的变化。