泛表达转录子(UXT)在肝癌细胞中的机制和功能研究

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目的:确定肝癌细胞中泛表达转录子(UXT)与RNA聚合酶相关因子复合物(PAF复合物)的相互作用,研究UXT基因在肝癌中的作用机制,探讨UXT基因在肝癌细胞中的功能。方法:1.利用免疫共沉淀的实验方法以及Western Blot实验方法研究UXT与PAF复合物相互作用。2.利用脂质体转染,结合Puromycin抗性筛选方法构建稳定过表达UXT基因的细胞系,并通过Western Blot实验方法检测了HA-UXT表达。3.构建沉默UXT基因细胞系SMMC-7721-tet-on-sh UXT细胞。4.通过逆转录荧光定量PCR技术研究UXT基因在肝癌细胞中的作用机制。5.通过细胞计数方法来研究过表达及沉默UXT基因对肝癌细胞增殖的影响。结果:成功构建过表达UXT基因的肝癌细胞系SMMC-7721-tet-on-HAUXT,利用该细胞系证明了UXT蛋白与PAF复合物之间存在相互作用;且在该细胞系中发现UXT基因对SMMC-7721肝癌细胞的增殖有促进作用。成功构建了诱导型沉默UXT基因的肝癌细胞系SMMC-7721-tet-on-sh UXT,使用该细胞系做细胞计数等实验,发现沉默UXT基因可以抑制肝癌细胞增殖。结论:1.本研究在肝癌细胞中确定了PAF复合物为UXT的相互作用蛋白。证明了在肝癌细胞中UXT和PAF复合物共同调控了基因转录。2.本研究发现过表达UXT基因可以促进肝癌细胞增殖,沉默UXT基因可以抑制肝癌细胞增殖,提示UXT基因对肝癌可能有促进作用。
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