弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种重要人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布,感染范围广,对人畜安全构成极大威胁。目前弓形虫疫苗的研究尚处于动物试验阶段,其安全性和有效性有待验证,所以推进弓形虫诊断技术的研究显得尤为重要。目前弓形虫病的诊断方法主要分为病原学诊断、免疫学诊断和分子生物学诊断,免疫胶体金检测技术作为免疫学诊断方法,以其操作简单、敏感特异、稳定性强、不需要特殊设备和结果判断直观等优点,被广泛应用于病原微生物、毒素、药物残留等方面的检测。本试验采用重组弓形虫速殖子膜表面蛋白SAG2(P22)作为诊断抗原,利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,与葡萄球菌A蛋白(SPA)结合形成探针,采用超速离心法纯化探针,对试纸条制备条件进行筛选,组装山羊免疫胶体金快速检测试纸条,并对试纸条的灵敏性、特异性和可靠性进行分析。本试验扩增了弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,通过大肠杆菌表达和切胶纯化,得到高纯度的重组SAG2蛋白。筛选得出试纸条制备的最佳条件：20nm粒径的胶体金在pH6.4的条件下标记25ug·L-1SPA形成的探针结合最牢固,以四硼酸钠稀释探针,以BSA+NaN3+聚乙二醇10000混合液作为探针稳定剂,以Sartorius CN140型硝酸纤维膜作为载体,以1.0mg mg·L-1的重组SAG2蛋白包被检测线,以0.9mg mg·L-1马抗山羊IgG包被质控线,组装的免疫胶体金检测试纸条检测效果最好。试纸条检测弓形虫阳性血清的稀释倍数可达到1：5120,与山羊球虫阳性血清、山羊布氏杆菌、日本血吸虫阳性血清均无交叉反应。