帕金森病患者血浆外泌体的分离鉴定及miRNA表达谱分析

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背景:microRNA(miRNA)是一种小的非编码RNA,通过促进靶mRNA降解或抑制其翻译起到转录后调节作用,近年来有研究报道miRNA参与帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的发生发展,且某些差异表达的miRNA有助于PD的诊断。目的:对比分析PD患者与对照者血浆外泌体中的miRNA,并进行靶基因预测及KEGG通路分析,以寻找出有意义的miRNA。方法:1、分别收集13例散发性PD患者及与其年龄性别相匹配的健康对照者的血浆样本。2、用Invitrogen试剂盒从血浆中分离外泌体,通过q Nano测定浓度及大小分布,Western blot检测外泌体标记蛋白CD63、Alix的表达以对其进行鉴定。3、使用高通道测序检测两组血浆外泌体miRNA的表达差异。4、使用miRNA靶基因预测软件对mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195进行靶基因预测,并对预测的靶基因进行KEGG通路分析。结果:1、从血浆中分离出mode直径<100nm、表达外泌体标记蛋白CD63和Alix的粒子,鉴定为外泌体。2、在表达明显差异(Ratio>2.0,P<0.05)的miRNA中,与对照组相比,PD组以上调为主(65.3%)。3、mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195预测的靶基因均参与神经营养因子信号通路。结论:1、本研究成功分离并鉴定了血浆外泌体。2、血浆外泌体mi R-10a-5p、mi R-485-5p、mi R-15b和mi R-195有望作为PD的生物标志物。
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