【摘 要】
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[目的]:构建KiSS-1基因腺相关病毒载体并转染并构建稳定表达KiSS-1的骨肉瘤MG-63细胞株,检测KiSS-1基因的表达,从而进一步研究腺相关病毒载体介导KiSS-1基因体外转染后对骨肉
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[目的]:构建KiSS-1基因腺相关病毒载体并转染并构建稳定表达KiSS-1的骨肉瘤MG-63细胞株,检测KiSS-1基因的表达,从而进一步研究腺相关病毒载体介导KiSS-1基因体外转染后对骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、粘附、趋化运动的影响。[方法]:1、KiSS-1腺相关病毒载体构建。2、阳离子脂质体法介导KiSS-1基因转染骨肉瘤MG-63细胞株。3、RT-PCR法检测转染前后后KiSS-1基因转录水平,Western blot法检测转染前后蛋白的表达。4、细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力变化。5、Transwell小室、Millicell法、细胞粘附实验等检测转染前后MG63增殖、侵袭、趋化运动、粘附能力的变化。[结果]:1、KiSS-1腺相关病毒载体构建:胎盘组织抽提总RNA并通过RT-PCR获得目的基因ORF,经TA克隆将目的基因连入PSNAV2中,送测序结果无误。2、阳性脂质体法介导KiSS-1基因转染骨肉瘤MG-63细胞株,经G418抗性筛选获得稳定表达KiSS-1的MG-63细胞株。3、转染前后的MG63细胞株的KiSS-1基因转录及蛋白表达水平有明显差异。4、转染KiSS-1基因的MG-63细胞较其亲代细胞增殖能力明显降低。5、转染KiSS-1基因的MG-63细胞较其亲代肿瘤细胞的侵袭能力明显下降。6、稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞与内皮细胞、层粘连蛋白FN、细胞外基质Matrigel的粘附能力明显下降。7、稳定表达KiSS-1的MG-63细胞较KiSS-1表达缺陷的MG-63细胞迁移能力明显降低。[结论]:1、利用脂质体将KiSS-1基因转染到骨肉瘤MG63细胞是可行、有效、稳定的。2、PSNAV2.0-KiSS-1能够介导目的基因在在骨肉瘤细胞内稳定、高效地表达。3、转染KiSS-1基因的骨肉瘤MG63细胞增殖能力明显受抑制。4、转染KiSS-1基因的骨肉瘤MG63细胞侵袭能力、黏附能力及迁移能力明显降低。5、KiSS-1基因能降低骨肉瘤细胞的侵袭和转移能力,可能成为抑制骨肉瘤转移基因治疗的一个有应用前景的基因。
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