论文部分内容阅读
穿破石是传统中药，具有抗炎、抗氧化、保肝和抗肿瘤等多种药理活性。本文以穿破石为研究对象，基于UPLC-QTOF-MS和GC-MS方法，对穿破石的化学成分进行研究，同时研究了穿破石对人肝微粒体CYP450酶的体外抑制活性。研究内容主要由以下三部分组成：
首先，对穿破石提取物的制备进行了研究。采用球磨辅助的超声波提取方法制备穿破石提取物，确定较佳的球磨条件为：在不添加助剂的情况下，按5.4%的球磨填充率，在100rpm的转速下球磨10min；确定较佳的超声波提取条件为：以60%的甲醇为提取溶剂，按1∶50g/mL的料液比，在35℃的条件下提取45min；建立并优化了穿破石提取物的超高效液相色谱分析方法，所有化学成分可在50min内分析完成；进一步分离纯化穿破石提取物中的氧化白藜芦醇，对大孔吸附树脂分离纯化方法进行了优化，确定了较佳的大孔吸附树脂种类及分离纯化氧化白藜芦醇的工艺参数。
其次，通过UPLC-QTOF-MS联用技术对穿破石甲醇提取物进行了分析，指认出其中的36个化合物，包括氧杂蒽酮类、有机酸类、黄酮类、芪类及其他类化合物；采用GC-MS联用技术结合保留指数辅助定性方法，确定穿破石提取物中的65个挥发性成分，包括33个脂肪类成分，21个萜类成分和11个芳香类化合物成分，分别占总成分的50.8%、32.3%和16.9%。
再次，进一步研究了穿破石对人肝微粒体CYP450酶的抑制活性，将穿破石提取物和氧化白藜芦醇与混合探针药物共同孵育，采用超高效液相色谱测定各探针药物的峰面积，并与阳性抑制剂进行对照。结果发现，穿破石提取物对CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的IC50值分别为0.3561、0.3324、0.4049和0.8615mg/mL；氧化白藜芦醇对CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的IC50值分别为106.4、135.1、125.8和125.6μM。对人肝微粒体CYP450酶的四种亚型酶来说，穿破石提取物对CYP3A4亚型酶的抑制程度最大，对CYP2E1的抑制程度最小；氧化白藜芦醇对CYP1A2亚型酶的抑制程度最大，对CYP3A4的抑制程度最小。与阳性抑制剂对比，穿破石总体抑制活性较弱。
首先，对穿破石提取物的制备进行了研究。采用球磨辅助的超声波提取方法制备穿破石提取物，确定较佳的球磨条件为：在不添加助剂的情况下，按5.4%的球磨填充率，在100rpm的转速下球磨10min；确定较佳的超声波提取条件为：以60%的甲醇为提取溶剂，按1∶50g/mL的料液比，在35℃的条件下提取45min；建立并优化了穿破石提取物的超高效液相色谱分析方法，所有化学成分可在50min内分析完成；进一步分离纯化穿破石提取物中的氧化白藜芦醇，对大孔吸附树脂分离纯化方法进行了优化，确定了较佳的大孔吸附树脂种类及分离纯化氧化白藜芦醇的工艺参数。
其次，通过UPLC-QTOF-MS联用技术对穿破石甲醇提取物进行了分析，指认出其中的36个化合物，包括氧杂蒽酮类、有机酸类、黄酮类、芪类及其他类化合物；采用GC-MS联用技术结合保留指数辅助定性方法，确定穿破石提取物中的65个挥发性成分，包括33个脂肪类成分，21个萜类成分和11个芳香类化合物成分，分别占总成分的50.8%、32.3%和16.9%。
再次，进一步研究了穿破石对人肝微粒体CYP450酶的抑制活性，将穿破石提取物和氧化白藜芦醇与混合探针药物共同孵育，采用超高效液相色谱测定各探针药物的峰面积，并与阳性抑制剂进行对照。结果发现，穿破石提取物对CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的IC50值分别为0.3561、0.3324、0.4049和0.8615mg/mL；氧化白藜芦醇对CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的IC50值分别为106.4、135.1、125.8和125.6μM。对人肝微粒体CYP450酶的四种亚型酶来说，穿破石提取物对CYP3A4亚型酶的抑制程度最大，对CYP2E1的抑制程度最小；氧化白藜芦醇对CYP1A2亚型酶的抑制程度最大，对CYP3A4的抑制程度最小。与阳性抑制剂对比，穿破石总体抑制活性较弱。