水稻Na~+/H~+离子转运相关蛋白OXHS6的功能分析

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土壤盐碱化是造成作物减产的主要非生物胁迫因素,培育耐盐的水稻品种在农业生产实践中十分重要。前期我们克隆到一个盐胁迫应答基因OXHS6,含有保守的XH,XS,Zf-XS结构域,是一个典型的XHS蛋白,但其具体的生物学功能并不清楚。因此,本研究拟通过鉴定OXHS6转基因植株的耐盐表型,启动子表达分析,下游基因的分子鉴定以及互作蛋白的筛选初步鉴定OXHS6在水稻耐盐途径中的功能。目前已取得如下进展:(1)将OXHS6全长CDS序列构建到原核表达载体pET-28a(+)中,并转化表达菌株BL21,在大肠杆菌中表达出一个大小为80KD的蛋白,经Western bl ot鉴定该蛋白即为目的蛋白OXHS6。(2)将OXHS6部分特异cDNA序列克隆到植物干涉表达载体ds1301上遗传转化粳稻中花11,经Real-Time PCR检测获得多株OXHS6表达量明显下调的T0代转基因植株。(3)以OXHS6超表达和RNAi植株为材料,Real-Time PCR检测转基因植株中OXHS6的表达水平,筛选家系进行不同时期、不同pH值下的盐胁迫实验。结果显示,RNAi植株对盐胁迫表现较高的敏感性,而过量表达OXHS6可以提高水稻的耐盐性。qPCR实验发现,在OXHS6超表达植株中,Na+转运相关基因OsHKT3的表达水平有显著增加,而其他5个OsHKT基因的表达均有不同程度的下降表达,初步推测OXHS6可能通过调控OsHKT的表达介导水稻的抗盐。(4)将OXHS6经重组反应构建到诱饵载体pDEST32上,经转录自激活和3-AT滴定实验鉴定,在水稻cDNA文库中筛选到3个可能的互作蛋白,为后续深入探讨OXHS6的耐盐分子机制提供了重要的分子基础。
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