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自然界微生物特别是放线菌能通过非核糖体途径合成具有药用价值的多肽类次级代谢产物。催化非核糖体肽生物合成的非核糖体肽合成酶(NRPS)常存在于合成次级代谢产物的基因簇中。NRPS是一大类具有多种功能的蛋白质复合体,它能够特异性识别、活化并转运氨基酸底物,并按特定顺序缩合在肽链上,形成非核糖体多肽。腺苷酰化结构域(A结构域)负责氨基酸识别活化,T结构域相当于载体,缩合结构域(C结构域)负责肽键的合成。研究NRPS基因的不同结构域的结构,为阐述次生代谢物生物合成基因簇组成与功能奠定基础。其主要结果如下:1.从大连海域海泥及海水中分离得到5株海洋放线菌,对其中抑菌效果显著的放线菌L1进行了生理生化及分子生物学鉴定,推定L1属于链霉菌属球孢链霉菌(Streptomyces globisporu)。2.设计用于扩增了非核糖体肽合成酶基因的C结构域和A结构域的特异引物,从L1基因组中扩增目的基因序列。通过优化PCR扩增的参数,确定了 C结构域基因PCR扩增的最适退火温度为60℃,目的扩增片段N1为414 bp;A结构域基因PCR扩增的最适退火温度为63℃,目的扩增片段大小A1为715 bp。对N1片段的生物信息学分析结果表明其与 non-ribosomal peptide synthetase(sequence ID:WP 046386756.1)相似性达到58%;Blastx比对发现,其推测的氨基酸序列中含有一个Condensation superfamily核心结合区,该区域为NRPS催化肽键形成的特有区域。而A1片段与non-ribosomal peptide synthetase(sequence ID:WP 0697352124.1)相似性达到 99%。Blastx 比对发现,其推测氨基酸序列中含有一个AFD_class_Ⅰ superfamily核心结合区,该包含属于非核糖体肽合成A结构域,此结构域负责催化ATP形成。证明我们扩增获得的目的基因片段即为非核糖体肽合成酶基因的C结构域和A结构域基因序列。