【摘 要】
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RegⅢγ是Reg(regenerating gene,再生基因)家族成员之一,属于C型凝集素的第IV家族,主要在哺乳动物胰岛、皮肤和肠道的上皮组织表达,具有多种生物学功能,是抗菌功能、抗炎功
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RegⅢγ是Reg(regenerating gene,再生基因)家族成员之一,属于C型凝集素的第IV家族,主要在哺乳动物胰岛、皮肤和肠道的上皮组织表达,具有多种生物学功能,是抗菌功能、抗炎功能、促进细胞增殖功能及损伤修复功能,在机体对病原体的免疫过程中有着十分重要的作用。鉴于这一蛋白的多种功能,RegⅢγ在新生断奶仔猪疾病防治方面具有非常广阔的前景。本研究取健康的仔猪肠道不同部位,通过免疫组化来确定Reg Ⅲγ在肠道不同部位表达的细胞类型,同时分析了重组猪RegⅢγ对IPEC-1细胞的活力影响,并采用不同诱导物来分析RegⅢγ在IPEC-1细胞中的表达情况:1、RegⅢγ蛋白在新生仔猪肠道不同部位的定位表达为了确定RegⅢγ基因在新生仔猪肠道不同部位不同发育阶段的定位表达特点,取0到5周健康的新生仔猪的肠道不同部位(十二指肠,空肠,回肠,结肠)组织,固定在35%的福尔马林中,后转移到75%的酒精中长期保存。用免疫组化检测RegⅢγ蛋白在不同肠道部位和不同时期的定位分布,结果表明:在仔猪的不同肠道内RegⅢγ蛋白在肠粘膜三种主要细胞类型:Paneth细胞和肠绒毛柱状细胞和杯状细胞均有表达。2、RegⅢγ蛋白对IPEC-1细胞系的增殖作用根据文献报道Reg蛋白对细胞具有增殖作用,为了鉴定猪重组RegⅢγ蛋白是否具有其作用,用CCK8法对IPEC-1细胞进行试验,结果表明:猪重组RegⅢγ蛋白对IPEC-1细胞具有明显的促进增殖作用。3、测定灭活细菌诱导IPEC-1细胞系对RegⅢγ的表达试验采用Q-PCR及Western blotting检测灭活细菌诱导的IPEC-1细胞中RegⅢγmRNA和Reg Ⅲγ蛋白的表达量。结果表明:当灭活细菌数量达到一定高度时,均能够使IPEC-1细胞中RegⅢγmRNA和RegⅢγ的表达量增加。
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