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目的通过观察中药补肾调冲方对环磷酰胺所致卵巢储备功能低下(DOR)雌性大鼠性激素水平的变化,卵巢、子宫超微结构的改变,卵巢、子宫相关凋亡因子和免疫因子水平的变化,探讨中药补肾调冲方对卵巢储备功能下降的预防、改善和调节作用,为中药治疗DOR和预防DOR的发生提供创新性思路和措施。方法12周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为空白对照组,模型组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组,结合雌激素预防组,补肾调冲方同时给药高、中、低剂量组,结合雌激素同时给药组,补肾调冲方治疗高、中、低剂量组,结合雌激素治疗组。除空白对照组外其他组均予腹腔注射75mg/kg环磷酰胺一次造模,在造模前用补肾调冲方高、中、低剂量或结合雌激素0.075mg/kg进行预防;在造模的同时用补肾调冲方高、中、低剂量或结合雌激素0.075mgk/g进行干预;在造模后用补肾调冲方高、中、低剂量或结合雌激素0.075mg/kg进行治疗。观察大鼠行为学改变,动情周期,卵巢、子宫超微结构的变化,计算卵巢、子宫指数。ELISA法检测大鼠血清FSH,LH,INHB,AMH含量;放射免疫分析法检测血清E2水平。免疫组化法和半定量RT-PCR法检测大鼠卵巢相关凋亡因子Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白及m RNA含量。荧光定量PCR法检测大鼠卵巢相关免疫因子TNF-α,IFN-γm RNA含量。结果1对大鼠动情周期的影响:空白对照组、补肾调冲方低剂量治疗组和同时给药组、结合雌激素各组大鼠动情周期为4-5天;模型组60%大鼠动情周期延长至处死当天,40%大鼠为6-8天;补肾调冲方高剂量各组动情周期为5-8天;补肾调冲方中剂量各组动情周期为4-6天;补肾调冲方低剂量预防组动情周期为4-6天。2对大鼠性激素水平的影响:模型组E2、INHB、AMH水平相比其他组明显偏低,差异有统计学意义(P<0.05);给予补肾调冲方中药和结合雌激素后各组E2、INHB、AMH水平分别可升高。模型组与其他组比较FSH、LH数值明显升高(P<0.05);给予补肾调冲方中药和结合雌激素后各组FSH、LH水平均可降低。模型组与其他组比较FSH/LH比值增大,比值大于2,给予补肾调冲方中药和结合雌激素后,各组FSH/LH比值均可降低。3大鼠子宫、卵巢指数变化:模型组与其他组比较子宫指数、卵巢指数均降低,给予补肾调冲方中药和结合雌激素后各组子宫指数、卵巢指数分别均可升高,整体比较预防组水平更接近正常水平。4大鼠卵巢、子宫相关凋亡因子表达水平的变化:免疫组化法检测模型组卵巢、子宫Bax、Caspase-3的蛋白表达水平显著高于其他组(P<0.05)。给予补肾调冲中药和结合雌激素后各组的Bax、Caspase-3表达水平均有所下降。模型组卵巢、子宫Bcl-2的蛋白表达水平明显低于其他各组(P<0.05)。给予补肾调冲中药和结合雌激素后各组的Bcl-2的蛋白表达水平均有所上升。半定量凝胶PCR检测卵巢Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA的相对表达量与免疫组化结果一致。整体比较预防组优于同时给药组,同时给药组由于治疗组。5大鼠卵巢相关细胞因子TNF-α、IFN-γm RNA表达水平的变化:模型组大鼠卵巢中TNF-α、IFN-γm RNA的表达水平高于其它组,差异有统计学意义(P<0.05),给予补肾调冲方和结合雌激素后各组TNF-α、IFN-γm RNA的表达水平较模型组分别有所下降。结论1环磷酰胺75mg/kg腹腔单次注射法可造成大鼠卵巢功能受损,动情周期紊乱或延长,大鼠卵巢储备功能下降模型制备成功。2补肾调冲方可通过下丘脑-垂体-卵巢轴的调控,调节DOR大鼠内分泌水平,提高大鼠卵巢储备能力,预防组可以在卵巢未受到损伤之前起到保护卵巢的作用,减少药物对卵巢的损伤。其作用机制推断为补肾调冲方通过抑制凋亡因子对卵巢抗原靶细胞的损伤,阻遏细胞衰亡的发展,减缓卵泡闭锁速度,促进了卵巢组织修复,从整体上恢复卵巢功能。3补肾调冲方治疗DOR疗效由高到低依次为低剂量组、中剂量组、高剂量组。补肾调冲方低剂量组和结合雌激素组比较疗效具有等效性。4整体干预效果预防组优于同时给药组,同时给药组优于治疗组。提示在临床中用环磷酰胺类制剂治疗肿瘤等疾病时,可以先给予补肾调冲方预防,减少化疗药物对性腺的损伤。