【摘 要】
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中华鳖（Pelodiscus sinensis）作为我国重要的淡水经济养殖品种,由于养殖密度在增加、水体环境变差,导致人工养殖过程中病害频发,制约了中华鳖养殖产业的可持续发展,其中由病毒引起的中华鳖疾病目前尚未有效的防治药物。许多研究表明干扰素基因刺激因子（Stimulator of interferongenes,STING）是机体抗病毒先天免疫反应过程中的重要感受器,可刺激诱导机体产生Ⅰ型干扰
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中华鳖（Pelodiscus sinensis）作为我国重要的淡水经济养殖品种,由于养殖密度在增加、水体环境变差,导致人工养殖过程中病害频发,制约了中华鳖养殖产业的可持续发展,其中由病毒引起的中华鳖疾病目前尚未有效的防治药物。许多研究表明干扰素基因刺激因子（Stimulator of interferongenes,STING）是机体抗病毒先天免疫反应过程中的重要感受器,可刺激诱导机体产生Ⅰ型干扰素进而发挥免疫调节作用。本论文利用免疫学、分子生物学手段研究中华鳖STING基因的表达和功能,探究其在先天性免疫应答中的作用机制,为中华鳖病害防治提供免疫学理论基础。主要研究结果如下:（1）利用RACE从中华鳖肝脏组织中克隆得到PsSTING基因,其cDNA全长为2145 bp,包括1152 bp的ORF,编码一个由383个氨基酸构成的蛋白,蛋白分子量为44.16 kDa,等电点为6.75,无信号肽,含4个跨膜区（TMs）、2个内质网滞留基序R20E21R22和R82H83R84、1个解旋酶结构域（CTD）和10个二聚化位点（DD）。同源性比对及系统进化树显示中华鳖STING蛋白与龟鳖目的同源性较高（70%以上）,与同为爬行动物纲鳄目动物的同源性次之,与无脊椎类动物的同源性最低（35%以下）。（2）qRT-PCR结果显示PsSTING基因在中华鳖组织中广泛分布,表达水平较高的组织分为脾脏、肝脏、小肠,在血细胞中表达水平最低;在嗜水气单胞菌、LPS、poly（I:C）刺激后0～96 h,PsSTING的mRNA出现不同程度地先上调后下调的规律,说明PsSTING很可能参与了中华鳖的先天性免疫应答。（3）We.stern Blot分析显示,嗜水气单胞菌、LPS和poly（I:C）的刺激会诱导PsSTING蛋白表达量上调,在肝脏、小肠中显示刺激后48 h达到最高值,与其mRNA表达水平一致,说明嗜水气单胞菌、LPS和poly（I:C）的刺激会影响该蛋白的表达水平。免疫荧光结果显示,PsSTING蛋白在肝细胞、脾脏动脉周围的淋巴组织细胞、小肠的杯状细胞、固有层和纹状缘中均有表达,并且随外源刺激物的诱导明显上调。（4）RNA干扰结果显示,PsSTING基因特异的siRNA干扰72h后能显著降低其mRNA在小肠中的表达水平（p<0.05）。另外,PsSTING基因沉默后,IFN信号通路中的基因TBK1、IRF3、IRF7、STAT6等和IFW-β显著下调。（5）双荧光素酶实验结果显示PsSTING蛋白能够激活pNF-κB和pIFN-β的启动子,说明PsSTING激活NF-κB和IFN-β的信号通路。
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