番茄斑萎病毒和水稻黑条矮缩病毒CP和RdRp的转基因烟草构建

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoqiudyy1988
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科作物,引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等病害。其基因组有10条双链RNA(S1-S10),S1编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),S10编码外壳蛋白(CP)。番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)能够侵染70科900多种植物,病害在世界范围内都有分布。其基因组包括三条单链RNA(L、M和S);RNA L为负义RNA,其互补链编码RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp),RNA S为双义RNA,其互补链编码核衣壳蛋白(N)。这两种病害均可造成严重的生产危害和经济损失,为进一步对这两种RNA病毒进行分子生物学水平研究,本研究旨在构建含有TSWV和RBSDV CP和RdRp蛋白的转基因烟草,尝试建立其反向遗传学体系。基于双元载体pROKⅡ,构建了分别含有RBSDV和TSWV CP和RdRp的pROKⅡ-TS-CP、pROKⅡ-TS-CP-8H、pROKⅡ-RB-CP、pROKⅡ-RB-CP-8H、pROKⅡ-TSRdRp、pROKⅡ-TS-RdRp-8H、pROKⅡ-RB-RdRp、pROKⅡ-RB-RdRp-8H等8个不带His标签或带His标签的转基因载体。采用农杆菌介导的叶盘法分别将8个载体转化普通烟(Nicotiana tabacum,NC89),普通烟叶片经过预培养、共培养、选择培养,筛选出抗性愈伤组织,将获得不定芽转入生根培养基获得完整的再生植株。通过DNA、RNA及蛋白水平检测表明,已得到含有TSWV CP(带有His标签)和RBSDV CP(带有His标签)的单价普通烟,其他单、双价转基因烟草正在培养和生长中。
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