棉团铁线莲中黄酮及三萜类成分分离纯化和生物活性研究

来源 :成都大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhangwz2005
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棉团铁线莲(Clematis hexapetala Pall.)是毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L.)多年生直立草本,是我国珍贵的传统中药材,早在我国的南北朝时期就有对其的使用的记载。本课题主要是对棉团铁线莲根及其根茎进行研究,分别对棉团铁线莲中化学成分的提取工艺进行响应面实验优化,对不同萃取组分提取物中黄酮类化合物含量进行比较,同时探究不同萃取组分在体外抗氧化活性的强弱程度,对棉团铁线莲中的单体化合物进行系统的分离纯化,鉴定其中单体化合物的结构,进而揭秘其中的构效关系。1.采用响应面法研究棉团铁线莲中的有效成分的提取工艺,以提取物中总黄酮的提取率为响应值,以液料比、提取时间、乙醇体积分数以及提取的温度为自变量进行单因素实验,通过响应面设计4因素、3水平实验,对棉团铁线莲中有效成分的提取工艺进行优化。实验结果表明,对棉团铁线莲中有效成分的提取影响程度从大到小依次为:超声时间>乙醇体积分数>液料>超声温度。其中棉团铁线莲中总黄酮最佳提取工艺为:乙醇体积分数75%,液料比25:1(m L/g),超声时间50 min,超声温度55℃。此条件下棉团铁线莲中总黄酮的提取率为4.43(mg/g)。2.通过实验比较棉团铁线莲有效成分的提取液经过萃取之后各组分之间黄酮类物质的差异,以黄酮类物质的提取量为检测指标。通过实验结果得知,棉团铁线莲各萃取组分提取物质量大小的顺序是:水相>正丁醇相>乙酸乙酯相>石油醚相;不同萃取液中黄酮类物质的浓度从高到低的顺序依次为:水相>正丁醇相>乙酸乙酯相>石油醚相;通过对数据分析可知,棉团铁线莲各萃取组分中黄酮类物质干重占比大小顺序依次为:石油醚相(95.84mg/g)>乙酸乙酯相(84.80mg/g)>正丁醇相(81.55mg/g)>水相(63.18mg/g)。3.分别对总提取物、石油醚萃取层、乙酸乙酯萃取层、正丁醇萃取层进行体外抗氧化实验,从3方面考察不同浓度的萃取层提取液对DPPH自由基的清除率、对羟基自由基的清除率以及对Fe3+的还原能力。实验结果显示:(1)在对DPPH清除率的实验中,各萃取层的提取液对DPPH的清除率大小依次为:乙酸乙酯层>水层>总提取物>正丁醇层>石油醚层。(2)在对羟基自由基的清除率实验中,各萃取层提取液对羟基自由基的清除率按从大到小顺序依次为:乙酸乙酯层>总提取物>水层>正丁醇层>石油醚层。(3)在对Fe3+还原能力的检测实验中,各萃取层的提取液对Fe3+离子的还原能力均强于抗坏血酸溶液,各萃取层的提取液对Fe3+的还原能力由大到小依次为:水层>乙酸乙酯层>石油醚层>总提取物>正丁醇层。4.利用多种色谱技术对棉团铁线莲中的有效成分进行分离纯化,利用13C、1H等多种波谱技术对其中的单体化合物结构进行解析。从棉团铁线莲乙酸乙酯和正丁醇部位中分离纯化了13个单体化合物,利用光谱分析及理化分析等技术和对核磁共振的数据检索、比对等方式对单体化合物的结构进行鉴定,分别鉴定单体化合物为:leonuriside A(1),紫丁香苷(2),isolariciresinol9-O-β-D-glucopyranoside(3),sinensioside A(4),(7S,8R)-urolignoside(5),落叶松苷4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),异荭草素(7),松脂醇二葡萄糖苷(8),杜仲树脂醇-吡喃葡萄糖苷(9),kizuta saponin K12(10),附子碱(11),clematangoticoside B(12),huzhangoside D(13)。化合物1~13为首次从棉团铁线莲中分离得到,其中化合物1~5、9、12均是首次从铁线莲属中分离得到。
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